结肠癌干细胞蛋白表达及生物学特性：培养与筛选分析

张东兴; 颜登国

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2015.45.013

摘要：背景：近年来国内外学者相继分离出 EpCAMhighCD44+结肠癌干细胞，但大多为有关大肠癌细胞系中肿瘤干细胞的分离研究，关于结肠癌干细胞功能的报道相对较少。目的：从结肠癌组织对结肠癌干细胞进行筛选和分离培养，探讨结肠癌干细胞蛋白表达情况以及生物学特性。方法：获得结肠癌组织标本，进行原代细胞分离。分离 EpCAMhighCD44+细胞，利用流式细胞仪进行检测、分选，并利用无血清培养基对细胞进行培养和传代，观察细胞球形成情况。对小鼠进行细胞皮下回植，观察其日常表现以及肿瘤生长情况。待肿瘤生长到直径1 cm以上之后，获得肿瘤组织进行免疫组化检验，观察EpCAMhighCD44+肿瘤细胞流式细胞仪分选情况和不同时间 EpCAMhighCD44+肿瘤细胞在无血清培养基中的生长情况，以及小鼠成瘤情况和移植瘤免疫组化检查中性上皮黏蛋白和结肠特异性分化标志物CK-20表达情况。结果与结论：经检测在获得的结肠癌组织中存在 EpCAMhighCD44+结肠癌干细胞，在结肠癌原代细胞中EpCAMhighCD44+细胞的比例为1.7%-38%。在无血清培养基中对EpCAMhighCD44+肿瘤细胞进行24 h的培养之后进行观察，可以发现产生一定体积较小松散的悬浮细胞球，但数量较少；培养21 d之后进行观察，可以发现形成形态一致的细胞球，且形态致密。经裸鼠皮下回植和观察，可以发现形成移植瘤。对移植瘤进行苏木精-伊红染色和观察，可以发现呈现出典型的结肠癌细胞形态特征。对移植瘤进行免疫祖化检查，所有移植瘤均能表选中性上皮黏蛋白和结肠特异性分化标志物CK-20。经检测发现，经10PPC、1PPC、0.1PPC 5-氟尿嘧啶干预，EpCAMhighCD44+Colo205细胞的增殖均得到促进，且随着药物作用时间的延长促进作用逐渐增强。提示结肠癌组织中存在 EpCAMhighCD44+结肠癌干细胞，其具有一定的增殖、更新、分化以及致瘤能力和耐化疗能力。