共沉默miR-221-3p/222-3p表达抑制骨髓间充质干细胞增殖及促成软骨分化
闫继红
杨姝
孙海梅
曹丹丹
张秀英
季凤清
郭多
吴波
孙婷怡
周德山
1.首都医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系组织胚胎学教研室,北京市,1000692.首都医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系组织胚胎学教研室,北京市,1000693.首都医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系组织胚胎学教研室,北京市,1000694.首都医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系组织胚胎学教研室,北京市,1000695.首都医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系组织胚胎学教研室,北京市,1000696.首都医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系组织胚胎学教研室,北京市,1000697.首都医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系组织胚胎学教研室,北京市,1000698.首都医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系组织胚胎学教研室,北京市,1000699.首都医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系组织胚胎学教研室,北京市,10006910.首都医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系组织胚胎学教研室,北京市,100069
摘要：背景：基于干细胞的组织工程技术作为治疗骨关节损伤修复的有效手段，具有广泛的应用前景。研究表明miRNA在调控干细胞向软骨分化过程中具有重要的作用。<br> 目的：探讨共感染慢病毒介导的反义miR-221-3p/222-3p(microRNA-221-3p，microRNA-222-3p)对人骨髓间充质干细胞成软骨分化的作用，为临床软骨损伤修复提供新的策略。<br> 方法：利用miRNA基因芯片技术筛选转化生长因子β3诱导人骨髓间充质干细胞成软骨分化过程中不同阶段表达差异的miRNA，并利用荧光实时定量PCR(RT-qPCR)验证；构建慢病毒人反义miR-221-3p/222-3p载体(Lv-miR-221-3p-inhibition ， Lv-miR-222-3p-inhibition)并共转染人骨髓间充质干细胞，空载体组(Lv-GFP)以及未转染组作为对照。利用CCK-8法检测沉默miR-221-3p/222-3p 6 d后细胞的增殖情况；通过番红O染色法、免疫组织化学方法以及RT-PCR验证各组软骨诱导21 d后软骨分化相关标志物的表达。<br> 结果与结论：构建的Lv-miRNA-221-3p/222-3p inhibition共转染人骨髓间充质干细胞，成功沉默了细胞中的miR-221-3p/222-3p表达水平；miRNA基因芯片与RT-qPCR验证结果显示miR-221-3p/222-3p在软骨分化后期表达明显降低；转染组与未转染组以及空载体组相比：①细胞增殖明显受到抑制。②番红O染色以及免疫组织化学显示软骨分化特征标志物硫酸软骨素以及Ⅱ型胶原表达增强。③RT-qPCR也证实硫酸软骨素以及Ⅱ型胶原的mRNA表达也明显上调。结果显示沉默人骨髓间充质干细胞miRNA-221-3p/222-3p，抑制了细胞增殖并促进了成软骨分化。
关键词：干细胞骨髓干细胞成软骨分化miR-221-3pmiR-222-3p慢病毒表达载体骨髓间充质干细胞沉默miRNA国家自然科学基金
分类号：R394.2(医学遗传学)
资助基金：国家自然科学基金面上项目(81271728)北京市自然科学基金面上项目(7152023)Funding(No.81271728)the Natural Science Foundation of Beijing, (No.7152023)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 8056-8061 )
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