过表达Notch1胞内域对c-Kit+骨髓间充质干细胞分化的影响
哈艳平
王振良
雷洪
丁然然
蒋晓帆
王可可
申志华
揭伟
1.广东医学院病理学系,广东省湛江市,5240232.广东医学院病理学系,广东省湛江市,5240233.广东医学院病理学系,广东省湛江市,5240234.广东医学院病理学系,广东省湛江市,5240235.广东医学院病理学系,广东省湛江市,5240236.广东医学院病理学系,广东省湛江市,5240237.广东医学院病理学系,广东省湛江市,5240238.广东医学院病理学系,广东省湛江市,524023
摘要：背景：Notch信号活化对干细胞分化有重要的影响，其效应具有细胞特异性，但有关Notch信号与c-Kit+骨髓间充质干细胞分化的相关报道较少。目的：分析Notch1信号活化对c-Kit+骨髓间充质干细胞分化的影响。方法：应用PCR从cDNA文库中调取Notch1受体胞内域(N1-ICD)序列，定向克隆入腺病毒穿梭质粒GV314构建重组质粒，与腺病毒辅助包装质粒pBHGlox?E1,3 Cre在HEK293T细胞进行同源重组，获得N1-ICD过表达腺病毒颗粒(N1-ICD-Ad)。分离SD大鼠股骨骨髓间充质干细胞，应用磁激活细胞分选法分选出c-Kit+亚群并用流式鉴定其纯度。将N1-ICD-Ad腺病毒感染c-Kit+骨髓间充质干细胞，8 d后定量RT-PCR或免疫荧光分析c-Kit+骨髓间充质干细胞中Notch1信号的活化及细胞的分化。结果与结论：(1)从cDNA文库中成功获得N1-ICD序列，将此序列成功克隆入线性化GV314载体，抗性克隆经测序证实无误；(2)在辅助包装质粒pBHGloxΔE1,3 Cre的协助下，成功获得滴度为2×1012 PFU/L重组腺病毒颗粒N1-ICD-Ad；(3)成功从SD大鼠骨髓间充质干细胞获得c-Kit+细胞亚群，纯度达91.6%。包装的腺病毒能有效感染c-Kit+骨髓间充质干细胞；(4)与空白对照组和阴性对照病毒组相比， N1-ICD-Ad 感染 c-Kit+骨髓间充质干细胞后 N1-ICD 在胞质与胞核聚集，显著上调了 Notch 下游基因Hes1的表达，显著诱导心肌细胞分化基因Nkx2.5和cTnT的表达，显著上调内皮细胞分化基因vWF的表达，轻微上调平滑肌细胞分化基因SM22α的表达。(5)实验结果提示Notch1信号的活化有助于c-Kit+骨髓间充质干细胞的多向分化，N1-ICD 过表达载体构建及腺病毒的包装并转染成功，为进一步研究Notch1信号活化对于干细胞生物学功能的影响奠定了基础。
关键词：干细胞骨髓干细胞细胞分化Notch信号腺病毒载体病毒包装骨髓间充质干细胞c-Kit国家自然科学基金
分类号：R394.2(医学遗传学)
资助基金：国家自然科学基金项目(81170121，81541004)广东医学院优硕培育基金(YS2015004，YS2015005)Funding(No.81170121,81541004)the Excellent Graduate Student Training Program of Guangdong Medical University, (No. YS2015004, YS2015005)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 785-792 )
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