关节腔内骨髓间充质干细胞与同种异体骨的共培养

高峰光; 周百岁; 牟海波

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2016.19.003

摘要：背景：构建组织工程软骨的时候，同种异体骨与骨髓间充质干细胞是常用的支架材料和种子细胞，以往大多采用体外培养的方式。膝关节内游离体可以长期存在于关节腔中，并维持一定的软骨组织学特性。因此，关节腔可能为软骨细胞的生长和发育提供良好的环境条件。<br>　　目的：探讨在关节腔内骨髓间充质干细胞与同种异体骨复合培养的效果。<br>　　方法：纳入5只新西兰新生白兔进行骨髓间充质干细胞分离与培养，利用1只成年新西兰白兔制备同种异体骨，进行骨髓间充质干细胞与同种异体骨复合。实验分组：腔内培养组将骨髓间充质干细胞与同种异体骨复合物培养于动物关节腔内，正常对照组设为同腔内正常软骨，体外培养组实施常规体外培养。培养4，8，12周进行组织学苏木精-伊红染色观察及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色观察。<br>　　结果与结论：①培养12周进行苏木精-伊红染色和观察，正常对照组细胞质和软骨基质出现红染，细胞核出现蓝染，软骨细胞按照一定的方向呈紧密状有序排列。腔内培养组细胞质和软骨基质出现红染，细胞核出现蓝染，支架材料基本吸收。软骨细胞长入支架之中，细胞按照一定应力方向排列，且形态变小。体外培养组软骨细胞出现大量增殖，但呈无序状排列；②经免疫组织化学染色和观察，计数可得，随着培养时间的推移，腔内培养组的 A 值呈现出不断上升的情况，体外培养组和正常对照组均未出现明显的改变。且培养4，8，12周，正常对照组和腔内培养组的 A 值均显著高于体外培养组(P <0.05)。培养4，8周，腔内培养组的A值均显著低于正常对照组(P <0.05)。但培养12周，腔内培养组与正常对照组A值差异无显著性意义(P>0.05)；③实验结果表明，在体外和关节腔内环境下，均可以利用同种异体骨与骨髓间充质干细胞复合培养获得组织工程软骨，且关节腔内培养可以获得更好的培养效果。