差速贴壁法原代培养椎间盘髓核细胞中的应用优势
胡永凯
孙浩林
漆龙涛
李淳德
1.北京大学第一医院骨科,北京市,1000342.北京大学第一医院骨科,北京市,1000343.北京大学第一医院骨科,北京市,1000344.北京大学第一医院骨科,北京市,100034
摘要：背景：髓核细胞作为椎间盘的主要功能细胞是退变机制研究的重点对象，维持体外培养的髓核细胞的生理功能及细胞表型的稳定至关重要。<br> 目的：通过对照研究差速贴壁法在大鼠椎间盘髓核细胞原代培养中的应用优势。<br> 方法：取4周龄雄性Wistar大鼠20只，体外分离培养椎间盘髓核细胞，待原代细胞汇合近90%时进行分组传代，差速贴壁组在传代细胞贴壁30 min时，将未贴壁细胞吸出重新调整浓度后传至新的培养皿中，对照组不作处理。差速贴壁组第1、2代细胞均采用该法分离纯化。对两组第3代细胞进行细胞形态学比较及免疫组化鉴定纯度分析、CCK-8检测细胞功能活性并绘制细胞生长曲线。<br> 结果与结论：①倒置显微镜观察及苏木精-伊红染色，差速贴壁组细胞均一性较对照组明显增高，对照组髓核细胞中混有较多的成纤维样细胞；②Ⅱ型胶原免疫组化鉴定及纯度分析，2组细胞胞浆均为被染成黄褐色，证实为髓核类软骨细胞；③纯度分析差速贴壁组阳性率显著高于对照组(P<0.05)；④CCK-8细胞生长曲线显示，2组细胞均经过2 d的生长潜伏期，3 d的指数生长期，进入生长停滞期，而对照组较差速贴壁组在潜伏期和指数增长期的早期生长更迅速。⑤结果说明，差速贴壁法是原代培养大鼠髓核细胞一种实用、有效的分离纯化方法；原代培养、经2次差速贴壁法分离纯化的第3代大鼠髓核细胞代谢旺盛、表型一致，细胞纯度更高，其对数增长期可以作为椎间盘细胞机制研究的最佳时期。
关键词：组织构建软骨组织工程差速贴壁髓核细胞纯化细胞去分化细胞老化国家自然科学基金
分类号：R318(医用一般科学)
资助基金：国家自然科学基金(81441058)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 6284-6289 )
英文信息