miR-21慢病毒载体构建及对骨髓间充质干细胞凋亡的影响
付霞霏
何援利
王雪峰
陈小莹
1.南方医科大学珠江医院妇产科,广东省广州市,5102822.南方医科大学珠江医院妇产科,广东省广州市,5102823.南方医科大学珠江医院妇产科,广东省广州市,5102824.南方医科大学珠江医院妇产科,广东省广州市,510282
摘要：背景:骨髓间充质干细胞移植后凋亡成为治疗化疗性卵巢早衰效果欠佳的主要原因.miR-21参与细胞增殖与凋亡的调控,有重要的抗凋亡作用.目的:构建miR-21慢病毒载体并感染骨髓间充质干细胞,观察其对化疗药物磷酰胺氮芥诱导的骨髓间充质干细胞凋亡的影响.方法:构建携带miR-21基因慢病毒表达载体LVX-shRNA2-rno-miR-21-5p,双酶切及基因测序鉴定证实载体构建成功.对载体进行包装、测定病毒滴度.将慢病毒颗粒以不同感染复数(20和40)感染骨髓间充质干细胞,检测感染效率,使用real-time PCR法检测骨髓间充质干细胞中miR-21的表达.流式细胞仪、Hoechst33342染色检测骨髓间充质干细胞在磷酰胺氮芥模拟的化疗微环境中的凋亡率.结果与结论:①成功构建miR-21慢病毒载体,病毒滴度约为6×1011 CFU/L;②载体转染骨髓间充质干细胞效率达90％以上;③miR-21组1(感染复数为20)、miR-21组2(感染复数为40)miR-21表达量明显高于骨髓间充质干细胞组及空载组(P=-0.000);④转染组骨髓间充质干细胞的凋亡率、凋亡指数均低于空载组及骨髓间充质干细胞组(P=0.001);⑤实验成功构建大鼠miR-21慢病毒载体系统,miR-21上调能抑制骨髓间充质干细胞凋亡,促进细胞增殖.
关键词：干细胞骨髓干细胞载体构建miR-21慢病毒骨髓间充质干细胞基因转染MicroRNAs细胞凋亡化疗性卵巢早衰国家自然科学基金
分类号：R394.2(医学遗传学)
资助基金：国家自然科学基金(81300462)广东省科技计划项目(2012B031800123)广东省科技计划项目(2013B021800145)the National Natural Science Foundation of China,(No.81300462)the Scientific Research Plan Projects of Guangdong Province,(No.2012B031800123,2013B021800145)
论文发表日期：2017-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 1-5 )
英文信息