miR-155通过抑制SMAD5调控成骨细胞骨分化
邱诗阳1
付希佳2
白晓雪3
杨军1
1.中国医科大学附属盛京医院南湖院区创伤骨科,辽宁省沈阳市,1100042.朝阳市中心医院神经内科,辽宁省朝阳市,1220003.吉林大学第一医院干部病房,吉林省长春市,130021
摘要：背景：诱导成骨细胞分化为骨细胞是组织工程中的研究热点，但分化过程中的调节机制尚未完全阐明。MicroRNA是一类内源性小RNA分子，可通过与靶基因mRNA的3’端非编码区结合在转录后水平调控基因表达。研究证实，microRNA在骨细胞分化过程中起到重要的调节作用。<br> 目的：研究miR-155对成骨细胞骨分化的调节作用以及作用机制。<br> 方法：取小鼠成骨细胞系MC3T3-E1细胞，加入小鼠骨形态发生蛋白2(200μg/L)进行成骨诱导，并与诱导第1，3，7，14天，通过qRT-PCR检测miR-155 mRNA的表达。并将MC3T3-E1细胞分为对照组、诱导组、miR-155组和miR-155 inhibitor组，对照组用α-MEM培养基培养，诱导组在培养基中加入骨形态发生蛋白2进行成骨诱导，miR-155组和miR-155 inhibitor组在成骨诱导之前分别转染miR-155和miR-155拮抗剂，诱导2周。<br> 结果与结论：①茜素红染色及碱性磷酸酶活性测定：经骨形态发生蛋白2诱导后，miR-155 mRNA表达呈时间依赖性下调。诱导组MC3T3-E1细胞茜素红着色强度、碱性磷酸酶活性和mRNA表达也显著高于对照组(P<0.01)；miR-155组茜素红着色强度明显低于诱导组，碱性磷酸酶活性和mRNA也明显低于对照组(P<0.01)，而miR-155 inhibitor组则呈反向变化(P<0.05)；②荧光报告基因检测和western blot检测：miR-155可与SMAD5 mRNA 3’非编码区结合，并明显降低MC3T3-E1细胞中SMAD5蛋白和mRNA表达(P<0.01)。结果表明，miR-155可通过负性调控SMAD5表达，抑制MC3T3-E1细胞的成骨分化。
关键词：组织构建骨细胞成骨细胞microRNA分化小鼠SMAD5细胞碱性磷酸酶qRT-PCRmRNA国家自然科学基金
分类号：R318(医用一般科学)
资助基金：国家自然科学基金(81600016)
论文发表日期：2017-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 538-544 )
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