骨髓间充质干细胞对经转化生长因子β1、骨桥蛋白基因沉默肝癌细胞MHCC97-H的影响

李天然; 黄晓斌; 黄楚恒; 卢光明; 李延军

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2017.05.006

摘要：背景：骨髓间充质干细胞对肝癌增殖能力和转移能力的影响是研究的热点，可通过基因工程技术对肝癌细胞进行改造，使其降低生物活性因子的表达，从而寻找合适的干预靶点，提高骨髓间充质干细胞的干预效能。目的：经转化生长因子β1、骨桥蛋白基因沉默的高转移潜能肝癌细胞(MHCC97-H)与骨髓间充质干细胞共培养，观察MHCC97-H细胞侵袭能力的变化，并通过动物模型荧光成像观察骨髓间充质干细胞对MHCC97-H肝癌组织动物模型的干预作用。方法：①将MHCC97-H细胞细胞分为4组，MHCC97-H设为空白对照组，MHCC97-H基因沉默转染阴性对照为阴性对照组，MHCC97-H-转化生长因子β1为转化生长因子β1基因沉默组，MHCC97-H-骨桥蛋白为骨桥蛋白基因沉默组；②Transwel s法进行各组细胞与骨髓间充质干细胞共培养实验，48 h后结晶紫染色，随机取3个视野，计数；③结合有红色荧光蛋白基因的各组MHCC97-H细胞株，分别自裸鼠右侧腋下接种复制皮下移植瘤模型。肿瘤体积到50 mm3开始瘤内注射骨髓间充质干细胞，4周后进行荧光强度分析；肝癌组织冰冻切片二脒基苯基吲哚细胞核染色后行荧光显微镜观察。结果与结论：①细胞计数结果表明，骨髓间充质干细胞使经基因沉默后的MHCC97-H细胞迁移数量明显减少；结晶紫染色病理图片显示，经基因修饰的MHCC97-H细胞迁移能力明显降低；②体内荧光成像结果显示，骨桥蛋白基因沉默组肿瘤体积明显缩小，荧光亮度低于其他组别，定量结果显示骨桥蛋白基因沉默组吸光度值明显降低，表明骨髓间充质干细胞对经骨桥蛋白干扰的MHCC97-H高转移潜能肝癌动物模型干预效能最佳；③病理切片荧光观察结果显示，骨髓间充质干细胞主要分布在肿瘤坏死区附近，骨桥蛋白基因沉默组荧光表达较转化生长因子β1基因沉默组和空白对照组多，表明MHCC97-H细胞经骨桥蛋白基因沉默后骨髓间充质干细胞在肿瘤中的分布增多；④结果提示，通过抑制骨桥蛋白和转化生长因子β1两种因子的表达可以降低肝癌细胞侵袭能力，经骨桥蛋白沉默可能更有利于基于骨髓间充质干细胞的生物治疗。