结直肠癌干细胞增殖及侵袭中ABCG2基因的效应
孙锋
广州中医药大学第一附属医院肛肠外科,广东省广州市,510405
摘要：背景:ABCG2转运蛋白能介导多重耐药,高表达 ABCG2蛋白能提高干细胞对于化疗药物的耐受性,但是ABCG2基因对结直肠癌干细胞增殖、侵袭机制尚未证实.目的:探讨ABCG2基因在结直肠癌干细胞增殖、侵袭中的作用.方法:常规培养结直肠癌细胞系HCT116,将其随机分为4份:其中2份采用免疫磁珠法分离CD133阳性细胞(结直肠癌干细胞),分别用ABCG2-siRNA和ABCG2过表达质粒转染,构建结直肠癌干细胞ABCG2蛋白低表达与过表达模型,设为ABCG2蛋白低表达和过表达组;另2份HCT116细胞分别设为细胞正常组、空质粒转染后对照组.用 MTT、Transwell 法测定不同模型下结直肠癌干细胞的增殖、侵袭变化;利用酶联免疫吸附实验及PCR法测定两种不同细胞模型下基质金属蛋白酶与mRNA表达水平.结果与结论:①流式细胞仪检测显示CD133阳性细胞在结直肠癌细胞系HCT116中占2.4%,经免疫磁珠分选纯化后其比例升至94.51%,证实分离培养的细胞为结直肠癌干细胞;②转染前4组细胞MTT值比较无差异(P > 0.05);ABCG2蛋白低表达细胞模型转染后MTT值低于过表达组(P < 0.05);③Transwell结果表明:ABCG2蛋白低表达组细胞迁移能力受到明显的抑制;而ABCG2过表达组穿过基底膜数目相对较多,细胞的迁移及侵袭能力明显增强(P < 0.05);④酶联免疫吸附实验显示ABCG2蛋白低表达组基质金属蛋白酶水平低于过表达组(P < 0.05);PCR测试mRNA结果与酶联免疫吸附实验相似;⑤提示:下调ABCG2蛋白表达能抑制结直肠癌干细胞增殖、侵袭,ABCG2基因通过调控基质金属蛋白酶水平影响结直肠癌干细胞活性.
关键词：ABCG2基因结直肠癌干细胞增殖基质金属蛋白酶酶联免疫吸附实验PCR法质粒转染免疫磁珠法
分类号：R394.2(医学遗传学)
资助基金：国家自然科学基金项目(81302976)the National Natural Science Foundation of China,(No.81302976)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 2057-2062 )
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