miRNA-140靶向结合自噬相关基因ULK1的验证
卢岩岩1
姚楠2
许学猛1
刘文刚1
蔡大可2
黄丹娥2
赵传喜1
陈国材1
1.广州中医药大学附属广东省第二中医院骨科,广东省广州市,5100952.广东省中医药工程技术研究院/广东省中医药研究开发重点实验室,广东省广州市,510095
摘要：背景:自噬可以通过抑制凋亡来缓解膝骨关节炎,miR-140是否可以调节自噬关键基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶-失调51样激酶1(uncoordinated 51 like kinase-1,ULK1)基因未见报道.目的:探索miRNA-140对ULK1基因的调控关系.方法:通过miRNA靶基因预测网站预测ULK1基因是否为miRNA-140的靶基因;将ULK1基因的3'端非翻译区全长序列载入海肾荧光素酶基因的下游,通过构建结合位点的突变序列,得到野生型和突变型载体,分别用野生型和突变型海肾荧光素酶载体转染293T细胞,检测每种转染细胞海肾荧光素酶的表达活性;运用miRNA-140 inhibitor对293T细胞进行干预,Western blot检测ULK1蛋白表达水平.结果与结论:与野生型载体组细胞相比,加入miR-140 mimics后荧光素酶的表达活性明显降低(P<0.01);当抑制miRNA-140后,ULK1蛋白的表达明显升高(P<0.01).结果证实,miRNA-140可以与ULK1基因靶向结合从而调控其表达.
关键词：miRNA-140ULK1基因软骨自噬凋亡点突变组织工程骨关节炎质粒载体转染双荧光素酶报告法
分类号：R318(医用一般科学)
资助基金：广东省自然科学基金(2014A030310128)广东省中医药局科研项目(20164002)广东省中医药局科研项目(20172008)广东省中医药局科研项目(20171023)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 3831-3836 )
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