腺病毒载体构建小鼠趋化素基因缺陷性细胞系
陈婷婷
曹园芝
熊玮
董少红
1.暨南大学第二临床医学院深圳市人民医院心内科,广东省深圳市,5180202.暨南大学第二临床医学院深圳市人民医院心内科,广东省深圳市,5180203.暨南大学第二临床医学院深圳市人民医院心内科,广东省深圳市,5180204.暨南大学第二临床医学院深圳市人民医院心内科,广东省深圳市,518020
摘要：背景:趋化素在动脉粥样硬化中的表达水平上调,趋化素可能参与了动脉粥样硬化的病理过程.目的:应用腺病毒介导的RNA干扰技术,构建并有效沉默趋化素基因的表达体,为研究其对动脉粥样硬化机制奠定实验技术基础.方法:以小鼠趋化素基因mRNA序列作为干扰靶点,以腺病毒基因pCD316-ZsGreen-shRNA作为质粒载体,设计4组靶向趋化素基因的shRNA序列,构建靶向鼠趋化素的shRNA表达质粒,另构建不针对任何已知mRNA的阴性对照shRNA表达质粒,筛选出干扰效果最好的shRNA,并在293T细胞对腺病毒进行包装和滴度测定.体外培养小鼠黑色素瘤细胞B16F10,转染腺病毒形成趋化素基因缺陷性B16F10细胞,用qPCR和Western blot检测感染腺病毒后细胞中趋化素mRNA和蛋白水平.结果与结论:①PCR以及基因测序结果表明Chemerin shRNA腺病毒载体构建成功,腺病毒的滴度为2×1010 PFU/mL,pDC-shRNA4对趋化素基因的抑制效果最显著(P<0.001);③qPCR和Western检测B16F10细胞中趋化素mRNA水平和蛋白水平,结果显示Chemerin-shRNA4达到一定的敲低效果;②表明腺病毒介导的shRNA-Chemerin4可有效沉默B16F10中趋化素基因的表达.
关键词：趋化素腺病毒RNA干扰动脉粥样硬化质粒基因转染免疫印迹组织工程血管平滑肌细胞
分类号：R318(医用一般科学)
资助基金：基础研究项目(JCYJ20150403101028192)深圳市科创委(JCYJ20170307100703967)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 3875-3879 )
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