在INS-1细胞中构建胰腺组织硫氧还蛋白相互作用蛋白过表达模型:两种腺病毒感染方法的差异
曹竹杰
冯艳金
李丹
王瑾
焦向英
1.山西医科大学生理学系,细胞生理学省部共建教育部重点实验室,山西省太原市 0300012.山西医科大学生理学系,细胞生理学省部共建教育部重点实验室,山西省太原市 0300013.山西医科大学生理学系,细胞生理学省部共建教育部重点实验室,山西省太原市 0300014.山西医科大学生理学系,细胞生理学省部共建教育部重点实验室,山西省太原市 0300015.山西医科大学生理学系,细胞生理学省部共建教育部重点实验室,山西省太原市 030001
摘要：背景:目前,通过腺病毒感染方法在细胞中构建蛋白质过表达模型的方法主要有2种,一是在腺病毒感染细胞4 h后补充1640完全培养基,24 h后换为完全培养基,再继续培养到48 h(方法Ⅰ);另一种是在腺病毒感染细胞4 h后用PBS洗去含有腺病毒的1640培养基,更换4 mL完全培养基培养到48 h,中间不做任何处理(方法Ⅱ).前者病毒的作用时间较长,感染效果较好,但病毒本身对细胞的损害程度较大,对实验模型的稳定性产生干扰.而后者病毒的作用时间短,对细胞的毒性低,但有时病毒感染效率较低,目的蛋白的表达效果欠佳.目的:在大鼠INS-1胰岛β细胞中,通过比较相同腺病毒载体介导的不同感染细胞的方法而寻找一种更加稳定而高效的硫氧还蛋白相互作用蛋白(Thioredoxin-interacting protein,TXNIP)过表达模型.方法:构建含有绿色荧光蛋白的腺病毒载体(Ad-GFP)和TXNIP过表达腺病毒载体(Ad-TXNIP-GFP).分别设立正常组、空病毒组和TXNIP过表达组,按照上述2种不同的方法进行病毒转染.结果与结论:①方法Ⅱ中的绿色荧光蛋白荧光强度和阳性效率高于方法Ⅰ;②方法Ⅱ中的细胞形态更好且细胞存活率更高;③方法Ⅱ中,目的基因TXNIP在mRNA水平和蛋白质水平的表达情况明显高于方法Ⅰ.由以上结果得出结论,腺病毒感染INS-1细胞4 h后,使用PBS将旧培养基洗去并更换新培养基,继续培养到48 h的方法更有利于在INS-1细胞中构建TXNIP过表达模型.
关键词：腺病毒载体绿色荧光蛋白INS-1细胞硫氧还蛋白相互作用蛋白TXNIP组织构建糖尿病存活率感染效率流式细胞术实时PCRWesternblot
分类号：R318(医用一般科学)
资助基金：国家自然科学基金(30800399)实验室建设项目(2014011049-12)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 4487-4492 )
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