一种高纯度原代神经元培养和高效率转染的方法
李兴统1
汤红艳2
马微1
杨金伟3
王先斌1
代云飞1
李俊彦4
郭建辉5
李力燕1
1.昆明医科大学神经科学研究所,云南省昆明市,6505002.昆明医科大学第一附属医院神经外科,云南省昆明市,6500323.昆明医科大学神经科学研究所,云南省昆明市 650500;云南省第一人民医院普外二科,云南省昆明市 6500324.昆明市第一人民医院神经外科,云南省昆明市,6500325.云南省第一人民医院普外二科,云南省昆明市,650032
摘要：背景:神经元的培养和细胞转染技术是在体外研究神经元生长发育及生理病理机制的重要手段,但目前原代培养的皮质神经元往往纯度不高、转染效率不高.目的:建立一种简单、高效、稳定的原代神经元培养及转染方法.方法:无菌条件下分离新生1 d SD大鼠大脑皮质,经0.25％的胰蛋白酶消化后离心,制备成单细胞悬液,以5×109 L-1细胞浓度接种至含神经元专用培养基的24孔细胞培养板进行原代培养,并于倒置显微镜下观察神经元形态的变化,使用神经元特异性标志物Tuj1和MAP2对培养的细胞进行鉴定;利用人工脂质体转染神经元,观察神经元转染效率.结果与结论:①体外培养的原代神经元具有较高的纯度,在培养第7天神经元特征明显,突起相互接触形成神经元网络,并表达神经元特异性标志物Tuj1与MAP2;利用人工脂质体转染神经元,转染效率较高;②采用该方法进行原代神经元培养,能够获得稳定的、高纯度的原代神经元;人工脂质体亦可高效率转染原代神经元.
关键词：神经元原代神经元培养形态学鉴定免疫荧光鉴定转染人工脂质体纯度组织构建
分类号：R318(医用一般科学)
资助基金：国家自然科学基金(31560295)国家自然科学基金(31260253)云南省应用基础研究计划(昆医联合专项)(2015FB098)云南省卫生科技计划(2014NS202)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 5186-5190 )
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