包埋载音猬因子壳聚糖微球纤维蛋白支架对鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞分化的影响
崔学文1
杨开元1
杨文静2
陆浩1
史文涛1
陈平波1
毕士奇1
沈元昊2
张志坚2
1.江苏大学附属医院骨科,江苏省镇江市,2120012.江苏大学医学院,江苏省镇江市,212013
摘要：背景:脊髓组织工程的基本思路是将体外分离培养的种子细胞种植到具有三维结构的生物材料支架上,并加入生物活性因子保持一定浓度,构成具有生物活性的细胞-支架复合物.然而如何构建合理的细胞生长微环境以及维持生物活性因子的最佳浓度一直面临诸多问题.该实验创新性地提出了双交联缓释体系,持续稳定地释放神经营养因子,以便更好地促进种子细胞的生长与分化.目的:利用冷冻干燥法,将包载音猬因子的壳聚糖微球填充于纤维蛋白胶,构建具有三维结构的复合生物工程支架,探讨该支架对外胚层间充质干细胞向神经元样细胞分化的影响.方法:①采用离子凝胶法制备包载音猬因子的壳聚糖微球,而后将其与纤维蛋白胶混合,冷冻干燥成型,即得到包埋载音猬因子壳聚糖微球的纤维蛋白支架,采用扫描电子显微镜观察支架微观结构和ELISA检测音猬因子缓释效果,并制备包载音猬因子的纤维蛋白支架和包载音猬因子的壳聚糖微球作为对照;②采用悬浮抗贴壁法获取外胚层间充质干细胞来源的神经球样细胞分别种植于上述支架和经多聚赖氨酸修饰的圆玻片上,加入神经诱导培养基培养.14 d后免疫荧光标记神经细胞相关蛋白β3-Tubulin、MAP-2和MBP,采用Western blot方法测定神经细胞相关蛋白表达水平.结果与结论:①扫描电子显微镜观察纤维蛋白胶经冷冻干燥后呈海绵型网状结构,载音猬因子的壳聚糖微球均匀分散在其中;②ELISA检测结果显示复合纤维蛋白支架缓释速度较为平缓且持续时间较长,形成更稳定、持续的缓释体系;③免疫荧光染色显示复合纤维蛋白支架组高表达神经细胞相关蛋白;同时,Western blot检测结果显示复合纤维蛋白支架组表达的神经细胞相关蛋白水平明显高于其他组(P ＜ 0.05);④结果表明,壳聚糖复合纤维蛋白支架缓释效果较好,该复合支架对外胚层间充质干细胞来源神经球向神经元样细胞分化有一定的促进作用.
关键词：外胚层间充质干细胞壳聚糖音猥因子纤维蛋白胶复合纤维蛋白支架缓释神经球样细胞神经元国家自然科学基金
分类号：R459.9(治疗学)R394.2(医学遗传学)R744(神经病学与精神病学)
资助基金：国家自然科学基金(51403086)江苏省自然科学基金(BK20140544)江苏大学高级人才启动基金(13JDG089)
论文发表日期：2019-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 4694-4700 )
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