利用Cre/loxP系统构建胰岛β细胞特异性敲除PDHA1基因的小鼠模型
王肖1
赖舒畅1
叶艳诗1
许雪娟1
白晓春2
沈洁1
1.南方医科大学第三附属医院,内分泌与代谢科,广东省广州市 5106312.南方医科大学第三附属医院中心实验室,广东省广州市,510631
摘要：背景:研究表明,2型糖尿病啮齿类动物模型及人体的丙酮酸脱氢酶复合体表达量降低,PDHA1基因缺陷也是导致丙酮酸脱氢酶复合体酶活性改变最常见的原因.目的:构建并鉴定胰岛 β 细胞特异性敲除PDHA1基因小鼠,为后续探究PDHA1基因在糖尿病发病机制方面作用提供模型基础.方法:实验方案经南方医科大学伦理委员会批准.利用Cre/loxP系统理论,将PDHA1loxp/loxp小鼠与胰岛 β 细胞特异性表达Cre重组酶的小鼠进行数代杂交,3-4周龄小鼠通过PCR法鉴定筛选基因型,子2代中基因型为PDHA1loxp/loxpCre+/-小鼠即为实验所需要构建的模型小鼠.取4周龄PDHA1flox/floxCre+/-小鼠(βKO小鼠组)与Cre+/-小鼠(对照组)各5只,给予相同的水和饲料,待8周龄时连续7 d注射腹腔注射他莫昔芬50 mg/kg诱导PDHA1基因敲除,观察3周后腹腔注射麻醉,取胰腺组织、脂肪组织、肝脏组织.采用qPCR法、Western Blot法、免疫组织化学法鉴定PDHA1基因敲除效果,观察小鼠表型.结果与结论:①PCR基因扩增筛选出基因型为PDHA1loxp/loxpCre+/-小鼠;②qPCR法检验小鼠胰腺、脂肪、肝脏组织,证实敲除效果具有组织特异性,胰岛中 βKO组小鼠PDHA1 mRNA的相对表达较对照组明显下降;③Western Blot检测及免疫组织化学法观察显示,βKO组小鼠PDHA1蛋白表达较对照组小鼠明显降低,证实敲除PDHA1基因效果明显;④结果说明,利用Cre/loxP系统成功构建胰岛β细胞特异性敲除PDHA1基因的小鼠模型,为动物水平上探究糖尿病发病机制提供新的靶点.
关键词：糖尿病PDHA1Cre/loxPβ细胞基因
分类号：R446(诊断学)R496(康复医学)R318(医用一般科学)
资助基金：广州市科技计划(201604020007)
论文发表日期：2019-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 5023-5029 )
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