shRNA沉默骨膜蛋白基因抑制人骨肉瘤的血管生成
徐朝健
张龙
程才统
冯毅
吕嘉
孙晓娟
吕智
1.山西医科大学第二医院骨科,山西省太原市,0300012.山西医科大学第二医院骨科,山西省太原市,0300013.山西医科大学第二医院骨科,山西省太原市,0300014.山西医科大学第二医院骨科,山西省太原市,0300015.山西医科大学第二医院骨科,山西省太原市,0300016.山西医科大学第二医院骨科,山西省太原市,0300017.山西医科大学第二医院骨科,山西省太原市,030001
摘要：背景:骨膜蛋白(periostin,POSTN)是一种细胞外基质蛋白,在多种肿瘤组织中表达上调,与肿瘤的迁移、增殖和血管生成能力有关.血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor2,VEGFR2/KDR)与其配体血管内皮生长因子结合后主要调控血管的发生和构建,但KDR与POSTN在骨肉瘤中的相互作用尚不清楚.目的:探讨POSTN在体内、外水平对人骨肉瘤增殖和体内血管生成能力影响及其作用机制.方法:①体外实验:qRT-PCR和Western blot检测人骨肉瘤临床标本组织中POSTN和KDR的mRNA及蛋白表达水平;qRT-PCR检测3株不同人骨肉瘤细胞系内POSTN表达,筛选基因表达最高的细胞系进行转染实验;转染慢病毒包装pPLK-POSTN-shRNA进入Saos-2细胞,选出3个作用靶点中抑制率最高的序列进行后续实验;②体内实验:取裸鼠(购自北京维通利华实验动物技术有限公司)12只,实验组(n=6)将慢病毒包装pPLK-POSTN-shRNA转染的Saos-2细胞注射至胫骨髓腔中,对照组(n=6)将慢病毒包装pPLK-Scramble-shRNA转染的Saos-2细胞注射至胫骨髓腔中,接种5周后,测量瘤体体积与质量;接种3周后,应用小动物活体成像检测血管生成情况;接种5周后取瘤体组织,Western blot检测POSTN、增殖细胞核抗原、KDR和p-AKT蛋白表达,病理切片免疫组织化学染色内皮细胞黏附分子蛋白表达.实验方案经山西医科大学第二医院伦理委员会批准(编号:2018002).结果与结论:①体外实验:骨肉瘤组织中POSTN和KDR的mRNA及蛋白水平表达均高于正常骨组织(P<0.01);Saos-2细胞中的POSTN基因表达量较MG-63和U2-OS细胞高;②体内实验:实验组瘤体体积和质量均小于对照组(P<0.05);实验组瘤体内血管生成量少于对照组(P<0.05);实验组POSTN、增殖细胞核抗原、KDR和p-AKT及内皮细胞黏附分子蛋白表达均低于对照组(P<0.05);③结果表明:沉默POSTN基因可抑制骨肉瘤血管生成,其机制可能与KDR/PI3K/AKT通路活化有关.
关键词：骨肉瘤骨膜蛋白POSTN蛋白血管生成KDRPI3K/AKT通路Saos-2细胞血小板内皮细胞黏附分子1
分类号：R459.9(治疗学)R318.06(医用一般科学)R816.8(放射医学)
资助基金：国家自然科学基金(81772867)云南省应用基础研究计划(201801D121215)云南省应用基础研究计划(201801D121326)
论文发表日期：2019-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 5638-5644 )
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