过表达P75神经生长因子受体负向调控骨髓间充质干细胞的成骨分化
朱伦井1
段江涛1
黄义杰2
王宁1
陈俊毅1
马跃刚1
贝朝涌1
1.桂林医学院附属医院四肢创伤骨科,广西壮族自治区桂林市,5410012.桂林医学院药学院药物化学教研室,广西壮族自治区桂林市,541100
摘要：背景:P75NTR广泛表达于神经组织及细胞中,并发挥着促进或抑制分化的双重作用;同时在骨折不愈合局部组织中也发现了P75NTR存在着过表达,因此研究P75NTR对骨髓间充质干细胞成骨分化的作用具有重要的意义,为临床上提高骨折不愈合修复的疗效提供重要靶点.目的:观察P75NTR过表达对大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导成骨分化的影响.方法:选取SD大鼠双侧股骨,用全骨髓分离贴壁法提取大鼠骨髓间充质干细胞并进行体外传代培养;构建表达EGFP的P75NTR过表达质粒GV358-P75NTR,并用空慢病毒载体包装收集P75NTR过表达慢病毒载体;选取体外培养至原代10 d的大鼠骨髓间充质干细胞,消化后种板,加入P75NTR过表达慢病毒及相关感染试剂进行感染实验,感染7 d后用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,Western blot检测P75NTR蛋白的过表达情况;感染后用常规培养基培养7 d,更换成骨诱导分化培养基培养,诱导培养后第7,10,14天用酶标法定量检测碱性磷酸酶活力,诱导培养后第7,14天用茜素红染色观察矿化结节形成情况.结果与结论:①P75NTR过表达慢病毒感染骨髓间充质干细胞后能表达出绿色荧光蛋白(感染效率约90％),且P75NTR蛋白表达量明显增多,与阴性病毒对照组比较差异有显著性意义(P<0.05),过表达P75NTR细胞模型构建成功;②与阴性病毒对照组及未转染组相比,P75NTR过表达组细胞诱导分化后相应时间点的碱性磷酸酶活力明显降低,矿化结节形成减少,细胞聚集分布减弱,差异有显著性意义(P<0.05);③结果表明,P75NTR过表达负向调控了大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化.局部组织中P75NTR过表达抑制周围骨髓间充质干细胞成骨分化可能是骨缺损或骨折不愈合的重要因素.
关键词：P75神经生长因子受体骨髓间充质干细胞成骨分化慢病毒碱性磷酸酶国家自然科学基金
分类号：R459.9(治疗学)R394.2(医学遗传学)R683(骨科学（运动系疾病、矫形外科学）)
资助基金：国家自然科学基金(81660366)广西自然科学基金(2015GXNSFAA139117)
论文发表日期：2020-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 20-26 )
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