两种传代方法影响人胚胎干细胞转染效率的比较
孙莉1
纵艳艳2
魏建峰3
1.江苏省脑病生物信息重点实验室,江苏省徐州市 221004;徐州医科大学,护理学院,江苏省徐州市 2210042.江苏省脑病生物信息重点实验室,江苏省徐州市,2210043.江苏省脑病生物信息重点实验室,江苏省徐州市 221004;徐州医科大学,基础医学院组织胚胎学教研室,江苏省徐州市 221004
摘要：背景:现有方法将外源分子如DNA导入到人胚胎干细胞用于科学研究的效率普遍较低,如何优化现有条件,提高转染效率显得尤为重要.目的:比较两种不同的传代方法对人胚胎干细胞系H9转染效率的影响,优化胚胎干细胞转染条件.方法:人胚胎干细胞系H9分别采用小克隆传代法和单细胞传代法进行传代,传代后继续培养细胞48 h,用Lipofectamine 3000转染pAdTrack-AKT1荧光质粒2 d后,荧光显微镜下观察荧光质粒的表达,流式细胞仪检测人胚胎干细胞的转染效率;RT-qPCR和Western blot分别检测转染后AKT1在mRNA和蛋白质水平的表达.结果与结论:①荧光显微镜下观察发现单细胞传代组表达荧光质粒的细胞数量更多,流式细胞仪检测单细胞传代法的转染效率[(47.18±2.00)％]高于小克隆传代法的转染效率[(19.52±0.86)％],差异有显著性意义(P<0.01);②单细胞传代组转染后AKT1 mRNA和蛋白的表达均高于小克隆传代组,差异有显著性意义(P<0.01);③结果表明,采用单细胞传代法,增加细胞与转染试剂脂质体的接触面积可提高人胚胎干细胞的转染效率.
关键词：人胚胎干细胞小克隆传代法单细胞传代法脂质体转染转染效率
分类号：R459.9(治疗学)R394.2(医学遗传学)R318(医用一般科学)
资助基金：江苏省高等学校自然科学研究项目(14KJB310021)江苏省脑病生物信息重点实验室开放基金(JSBl1403)
论文发表日期：2020-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 72-76 )
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