羊水干细胞定向及稳定分化为神经元样细胞体系的建立
宗凌1
陈观贵2
张兰珍3
翟锦明2
龙艳波2
刘晓岚3
1.广州医科大学附属第二医院,耳鼻咽喉科,广东省广州市 510260;中山大学附属第一医院耳鼻咽喉科2.广州医科大学附属第二医院,耳鼻咽喉科,广东省广州市 5102603.广州医科大学附属第二医院,产科,广东省广州市 510260
摘要：背景:利用干细胞分化代替受损神经元的设想,已经逐渐受到科研工作者的关注.胚胎干细胞和诱导性多能干细胞虽然具有良好的神经元分化潜能,但由于接种活体动物具有致瘤性,限制了其进一步的深入研究.目的:建立稳定的羊水干细胞分选、培养、成神经诱导分化体系,探讨其作为神经元再生种子细胞的可行性.方法:经B超引导下,穿刺获取孕19-22周期间的羊水样本10 mL,磁珠分选其中c-Kit阳性的羊水干细胞.免疫荧光染色鉴定羊水干细胞标记物Oct-4、Sox2;RT-PCR检测羊水干细胞多次传代后干性标记物c-Kit、Oct-4、Sox2、Nestin的表达;羊水干细胞悬滴培养4 d观察拟胚体的形成情况;采用"两阶段"分步诱导羊水干细胞向神经元方向分化,免疫荧光染色观察Neuro D、Tuj1的表达.结果与结论:①羊水中可分选出大约1％的c-Kit阳性羊水干细胞;②(75.0±4.6)％的羊水干细胞表达Oct-4,(86.0±2.8)％的羊水干细胞表达Sox2;③RT-PCR方法检测干性标记物c-Kit、Oct-4、Sox2、Nestin的表达量并不随细胞传代数的增加而改变;④经悬滴培养可形成拟胚体并表达Oct-4;⑤免疫荧光证实未经诱导的羊水干细胞表达神经元标记物Tuj1,但缺乏典型的神经元形态特征;RT-PCR证实不同羊水干细胞标本都能检测到Tuj1的表达,同一样本多次传代也能稳定检测到Tuj1的表达;⑥羊水干细胞经碱性成纤维细胞生长因子、脑源性神经营养因子、神经营养因子3的两阶段分步诱导后表达神经干细胞标记物Neuro D和神经元标记物Tuj1,具有神经元样细胞的形态特征.
关键词：羊水干细胞拟胚体悬滴培养神经元分化神经营养因子
分类号：R459.9(治疗学)R394.2(医学遗传学)R764(耳科学、耳疾病)
资助基金：国家自然科学基金(81700912)广东省自然科学基金(2016A030310286)
论文发表日期：2020-05-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 2055-2060 )
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