Scleraxis慢病毒转染人羊膜间充质干细胞促进兔腱-骨愈合
邹刚
张骏
尤奇
汤井沣
金瑛
杨继滨
朱喜忠
刘毅
1.遵义医科大学附属医院骨一科,贵州省遵义市 5630002.遵义医科大学附属医院骨一科,贵州省遵义市 5630003.遵义医科大学附属医院骨一科,贵州省遵义市 5630004.遵义医科大学附属医院骨一科,贵州省遵义市 5630005.遵义医科大学附属医院骨一科,贵州省遵义市 5630006.遵义医科大学附属医院骨一科,贵州省遵义市 5630007.遵义医科大学附属医院骨一科,贵州省遵义市 5630008.遵义医科大学附属医院骨一科,贵州省遵义市 563000
摘要：背景:人羊膜间充质干细胞来源广泛、免疫排斥低,具有多系分化潜能,研究证实Scleraxis基因能够诱导人羊膜间充质干细胞向韧带分化,加速腱-骨愈合进程.目的:探讨Scleraxis诱导人羊膜间充质干细胞分化后是否能够在体内促进兔腱-骨愈合,为临床腱-骨愈合提供新的思路和方向.方法:①经遵义医科大学附属医院伦理委员会批准,术前签署知情同意书,取健康足月产妇胎盘,经过2次胰酶消化分离培养人羊膜间充质干细胞,然后倒置显微镜下观察细胞形态,传代继续培养至第3代用于后续实验;②体外将携带有Scleraxis基因的慢病毒转染至人羊膜间充质干细胞,通过实时荧光定量PCR检测韧带相关基因的表达水平,免疫荧光检测韧带相关蛋白的表达水平;③将转染Scleraxis基因的人羊膜间充质干细胞注射到兔关节外腱-骨模型中,3个月后取标本观察腱-骨愈合情况.结果与结论:①传代至第3代的人羊膜间充质干细胞在倒置相差显微镜下呈长梭形、涡旋状贴壁生长;②第3代人羊膜间充质干细胞经过Scleraxis基因慢病毒感染24 h后表达绿色荧光,96 h荧光表达量最强且稳定;③CCK-8检测转染病毒后对细胞的生长速度无影响;④实时荧光定量PCR显示:慢病毒转染Scleraxis基因后,其mRNA表达量成倍的增加,并且韧带相关基因Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Fibronectin、Tenascin-C的mRNA表达量也明显提高;⑤免疫荧光结果显示:慢病毒转染Scleraxis基因后其韧带相关蛋白Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Fibronectin、Tenascin-C的表达水平提高;⑥动物体内实验证实:慢病毒转染Scleraxis基因后能够加速兔关节外腱-骨模型的腱-骨愈合.
关键词：人羊膜间充质干细胞Scleraxis基因转染慢病毒腱-骨愈合组织工程
分类号：R459.9(治疗学)R394.2(医学遗传学)R686(骨科学（运动系疾病、矫形外科学）)
资助基金：贵州省科技厅联合基金(黔科合LH字[2017]7105号)
论文发表日期：2020-05-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 2080-2086 )
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