缝隙连接蛋白43在骨关节炎软骨及细胞中表达及shRNA慢病毒载体的构建
薛俊杰1
李婧瑜2
张莉1
任超超1
1.首都医科大学附属北京口腔医院正畸科,北京市1000502.首都医科大学附属北京天坛医院口腔科,北京市 100070
摘要：背景:缝隙连接蛋白43在骨关节炎的发生发展中具有重要作用,但具体机制尚不明确.目的:通过体内和体外实验检测缝隙连接蛋白43在骨关节炎软骨和细胞中的表达,验证骨关节炎软骨及软骨细胞(SW1353)中缝隙连接蛋白在连接蛋白家族的主导地位;构建缝隙连接蛋白基因的shRNA慢病毒载体,建立SW 1353细胞的稳定转染细胞株.方法:C57BL/6小鼠6只,通过前交叉韧带横切术建立小鼠骨关节炎动物模型,通过免疫组织化学染色检测骨关节炎与正常关节中缝隙连接蛋白表达水平的差异.采用RT-PCR技术检测SW 1353细胞中缝隙连接蛋白43 mRNA的表达,同时检测SW1353细胞中缝隙连接蛋白37、40、45和46基因的表达水平作为对照.将缝隙连接蛋白43 mRNA连接到含有增强型绿色荧光蛋白基因的慢病毒载体中,重组获得慢病毒质粒,将其与辅助包装质粒共转染293T细胞.所获慢病毒载体感染SW1353细胞后,检测缝隙连接蛋白43的表达.实验方案经口腔疾病研究国家重点实验室伦理委员会批准(批准号为SKLODLL2013A172).结果 与结论:①缝隙连接蛋白43在小鼠骨关节炎软骨组织中的表达较健康关节明显增加;②缝隙连接蛋白43 mRNA在SW 1353细胞中的表达明显高于缝隙连接蛋白37、40、45和46的基因表达,SW 1353细胞中的缝隙连接蛋白43在连接蛋白家族中具有主导地位;③缝隙连接蛋白43 shRNA慢病毒载体可抑制SW 1353细胞中缝隙连接蛋白43 mRNA的表达;④实验筛选出稳定转染的SW 1353细胞株,为验证缝隙连接蛋白43在骨关节炎中的作用机制奠定了基础.
关键词：骨关节炎缝隙连接蛋白43软骨细胞慢病毒
分类号：R446(诊断学)R496(康复医学)R318(医用一般科学)
资助基金：首都医科大学基础临床科研合作项目(16JL32)首都医科大学附属北京口腔医院学科建设基础专项(16-09-10)
论文发表日期：2020-08-11
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：9( 3627-3635 )
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