独活寄生汤拆方通过Wnt/β-catenin信号通路抑制软骨细胞炎症反应
李慧1
马玉环1
许丽梅2
王圣杰1
许云腾2
何晓娟1
贾良良2
曾建伟2
王丽丽2
李西海3
叶蕻芝4
1.福建中医药大学药学院,福建省福州市 3501222.福建中医药大学中西医结合研究院,福建省福州市3501223.福建中医药大学中西医结合研究院,福建省福州市350122;福建省康复重点实验室,福建省福州市3501224.福建中医药大学中西医结合研究院,福建省福州市350122;福建省中西医结合老年性疾病重点实验室,福建省福州市 350122
摘要：背景:Wnt/β-catenin信号通路在骨关节炎的炎症反应病理过程中扮演着重要角色,而独活寄生汤拆方有效抑制软骨细胞的炎症反应有待进一步深入研究.目的:探讨独活寄生汤拆方是否可以通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制由脂多糖诱导的软骨细胞炎症反应.方法:①取SD雄性大鼠,采用机械Ⅱ型胶原酶消化法获取膝关节软骨细胞,倒置相差显微镜观察软骨细胞的形态结构,Ⅱ型胶原免疫组化鉴定软骨细胞.②用不同质量浓度的独活寄生汤拆方(300,400,500 mg/L)干预由脂多糖(10μg/L)诱导的软骨细胞炎症模型,干预8 h后,采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定各组软骨细胞培养液中白细胞介素1β、肿瘤坏子因子α水平,确定独活寄生汤拆方干预浓度.③将第2代软骨细胞分为4组:空白组含正常培养液;模型组培养液中含10μg/L脂多糖;独活寄生汤拆方组培养液中含10μg/L脂多糖和400 mg/L独活寄生汤拆方;抑制剂组培养液中含10μg/L脂多糖和10 mg/L Dickkopf-1.干预8 h后,采用Western blot法检测 β-catenin、Wnt-4、Frizzled-2、GSK-3β、CKI-ε 的蛋白表达量.结果与结论:①软骨细胞鉴定:获取的软骨细胞Ⅱ型胶原免疫组化染色胞浆呈棕黄色,具备软骨细胞典型特征;②ELISA结果显示:模型组培养液中白细胞介素1β 和肿瘤坏子因子 α水平均高于空白组,400 mg/L独活寄生汤拆方干预后两种炎症因子水平较模型组显著降低,所以确定独活寄生汤拆方干预浓度为400 mg/L;③Western blot结果显示:模型组 β-catenin、Wnt-4、Frizzled-2、CKI-ε 的蛋白表达量均高于空白组,而GSK-3β蛋白表达量低于空白组;独活寄生汤拆方组和抑制剂组β-catenin、Wnt-4、Frizzled-2、CKI-ε 蛋白表达量低于模型组,而GSK-3β 蛋白表达量高于模型组.④结果表明:独活寄生汤拆方通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制由脂多糖诱导的软骨细胞炎症反应.
关键词：独活寄生汤拆方软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路Wnt-4Frizzled-2β-cateninGSK-3βCKI-ε
分类号：R459.9(治疗学)R289(方剂学)R318(医用一般科学)
资助基金：中国博士后科学基金(2016M600625)中国博士后科学基金(2017T100591)
论文发表日期：2020-12-11
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 5589-5594 )
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