hsa-miRNA-223-3p调控人骨髓间充质干细胞成骨分化的作用
耿瑶1
尹志良2
李兴平1
肖东琴3
侯伟光4
1.西南医科大学,四川省泸州市 646000;成飞医院,四川省成都市 6100002.成飞医院,四川省成都市 6100003.川北医学院第二临床医学院·南充市中心医院组织工程与干细胞研究所,四川省南充市 6370004.西南医科大学,四川省泸州市 646000;航空工业三六三医院,四川省成都市 610000
摘要：背景:研究发现miR-223-3p在骨质疏松患者体内高表达,但其相关机制研究甚少.目的:探讨hsa-miR-223-3p对骨髓间充质干细胞成骨分化的调节作用.方法:Percoll密度梯度离心法分离、培养骨髓间充质干细胞,诱导其成骨分化,然后过表达hsa-miR-223-3p,RT-qPCR和Western blot方法检测Wnt信号通路标志物Wnt5a及其下游信号分子OPG、RUNX2的mRNA和蛋白水平变化.构建pmirGLO/Wnt5a-3'UTR和pmirGLO/Wnt5a-3'UTR mut质粒,分别与hsa-miR-223-3p mimics/对照质粒共转染至293T细胞,双荧光素酶报告基因系统验证hsa-miR-223-3p与Wnt5a的靶定关系.结果与结论:①随着成骨诱导时间的延长,细胞培养液中碱性磷酸酶水平逐渐增加,茜素红染色可见暗红色或红褐色钙盐结节沉积逐渐增加;②过表达hsa-miR-223-3p后,细胞中Wnt5a、OPG、RUNX2的mRNA和蛋白水平降低;③hsa-miR-223-3p直接靶定Wnt5a的3'UTR区,降低Wnt5a的荧光素酶活性;突变掉Wnt5a的结合位点,靶定作用消失.封闭hsa-miR-223-3p后,野生型Wnt5a的荧光素酶活性增加,突变型Wnt5a的荧光素酶活性不变;④结果表明,在骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程中,过表达hsa-miR-223-3p可以影响Wnt信号通路标志物Wnt5a及其下游信号分子OPG、RUNX2的表达.hsa-miR-223-3p可直接与Wnt5a结合,Wnt5a作为hsa-miR-223-3p的下游靶基因,受其负向调控.
关键词：干细胞骨髓间充质干细胞miRNA成骨分化通路基因实验
分类号：R459.9(治疗学)R394.3(医学遗传学)Q756(分子遗传学)
资助基金：国家自然科学基金(81171472)四川省科技厅应用基础项目(2016JY0123)四川省科技厅应用基础项目(2018JY0100)南充市市校合作科研专项资金(19SXHZ0099)南充市市校合作科研专项资金(19SXHZ0236)
论文发表日期：2021-03-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1008-1013 )
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