三维胶原HepaRG微球的建立及其体外功能特征
黎少
梁永康
高毅
彭青
1.南方医科大学珠江医院肝胆二科,广东省广州市 5102802.南方医科大学珠江医院肝胆二科,广东省广州市 5102803.南方医科大学珠江医院肝胆二科,广东省广州市 5102804.南方医科大学珠江医院肝胆二科,广东省广州市 510280
摘要：背景:近年来的一些研究显示,HepaRG细胞三维培养模型可较好地模仿体内微环境,与二维培养相比显示出更好的肝分化和功能情况.目的:选择HepaRG人源肝祖细胞制备三维胶原微球,评价胶原微球内细胞适应性培养和功能表达情况.方法:以胶原蛋白作为基质材料,选择HepaRG和HepG2细胞分别建立三维胶原细胞微球模型,形成稳定的细胞球体,以HepaRG普通微球、HepG2普通微球、HepaRG二维培养、HepG2细胞二维培养为对照.培养1,6,12 d后,死活染色法观察细胞存活情况;培养1,6,12,16 d后,检测各组上清尿素合成与CYP3A4分泌量;培养12 d后,采用qPCR检测CYP3A4、CYP1A2、UGT1A1、CPS1 mRNA相对表达,Western Blot检测肝细胞标志物白蛋白和CYP3A4蛋白表达水平.结果 与结论:①连续培养12 d的活死染色显示,三维胶原微球内的活细胞数量较多,死细胞较少,具有较高的细胞活率,并且HepaRG三维胶原微球内的细胞呈现出多个细胞簇紧密连接的交联结构;②HepaRG三维胶原微球培养1,6,12 d后的尿素含量高于HepaRG二维培养(P<0.05),HepG2三维胶原微球培养1,6,12,16 d后的尿素含量高于HepG2二维培养(P<0.05),HepaRG三维胶原微球培养1,6,12 d后的CYP3A4分泌量高于HepaRG二维培养(P<0.05),HepG2三维胶原微球培养6,12 d后的CYP3A4分泌量高于HepG2二维培养(P<0.05);③HepaRG三维胶原微球内的CYP3A4、CYP1A2、UGT1A1和CPS1 mRNA相对表达高于HepaRG二维细胞(P<0.05),HepG2三维胶原微球内的CYP1A2相对表达高于HepG2二维培养(P<0.05);④HepaRG三维胶原微球内的白蛋白、CYP3A4蛋白表达水平高于HepG2三维胶原微球、普通微球、二维培养(P<0.05);⑤结果表明,HepaRG三维胶原微球具有高表达的肝功能水平,可为体外药物代谢评价、组织工程等应用提供研究参考.
关键词：材料HepaRG细胞三维培养胶原微球细胞表型细胞色素P450酶系尿素合成基因表达
分类号：R459.9(治疗学)R318.08(医用一般科学)Q249(细胞形态学)
资助基金：国家重点研究计划(2018YFA0108200)国家重点研究计划(2018YFC1106400)国家自然科学基金(31972926)广东省自然科学基金(2014A030312013)广东省自然科学基金(2018A030313128)广州市科技计划(201803010086)
论文发表日期：2021-06-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 2541-2547 )
英文信息