miR-146b过表达慢病毒载体构建及对海马神经干细胞增殖的影响
戴雅玲1
陈乐文1
何肖君1
林华伟1
贾微微1
陈立典2
陶静2
柳维林3
1.福建中医药大学康复医学院,福建省福州市3501222.福建中医药大学康复医学院,福建省福州市350122;福建中医药大学康复产业研究院,福建省福州市3501223.福建中医药大学康复产业研究院,福建省福州市350122
摘要：背景:目前越来越多的研究证实miR-146b在神经系统中发挥重要作用,其为神经系统性疾病提供新的治疗方向.目的:构建大鼠miR-146b过表达慢病毒载体,观察miR-146b过表达对原代海马神经干细胞增殖的影响.方法:①PCR扩增获得大鼠miR-146b全长序列,经酶切连接到慢病毒载体pLVX-Luciferase-Puro,经双酶切和DNA测序鉴定,然后用293T细胞进行慢病毒包装并收集病毒上清液;②分离和培养新生SD大鼠原代海马神经干细胞,采用pLVX-Luciferase-rno-miR-146b-Pu ro慢病毒转染海马神经干细胞,转染24,48 h后采用RT-PCR检测miR-146b的表达水平,免疫荧光检测Nestin的表达,MTS法和Edu法检测细胞增殖情况,转染48 h后采用流式细胞仪检测细胞周期变化.结果 与结论:①测序鉴定结果显示大鼠miR-146b成功克隆至pLVX-Luciferase-Puro过表达载体中;②转染24 h和48 h后海马神经干细胞中miR-146b表达水平均显著升高;③miR-146b过表达后Nestin免疫荧光阳性细胞数量显著减少,细胞增殖率下降,细胞周期主要停留在G1期;④结果表明,成功包装大鼠miR-146b过表达慢病毒载体,转染后能抑制大鼠原代海马神经干细胞增殖,但其具体调控的靶基因作用机制有待进一步研究.
关键词：神经干细胞海马miR-146b慢病毒转染细胞增殖大鼠
分类号：R459.9(治疗学)R394.2(医学遗传学)R318(医用一般科学)
资助基金：福建省科技厅科技平台建设项目(2018Y2002)福建省自然科学基金(2016J01382)
论文发表日期：2021-07-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 3024-3030 )
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