构建过表达FNDC5慢病毒载体抑制平滑肌细胞的增殖与迁移
王向
韦朝俊
王尧
潘裕佳
刘大男
贵州医科大学附属医院心内科,贵州医科大学医学科学研究所,贵州省贵阳市550004
摘要：背景:Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5(fibronectin type Ⅲ domain containing 5,FNDC5)属于一种肌肉因子,主要表达于骨骼肌及其他肌肉较多的组织中,可通过结合不同受体影响多种细胞增殖与迁移.目的:构建过表达FNDC5基因的慢病毒载体,获得稳定转染FNDC5的平滑肌细胞系,并观察其对平滑肌细胞增殖与迁移的影响.方法:①体外培养血管平滑肌细胞,经鉴定合格后传代培养.②PCR扩增目的基因FNDC5,将目的基因构建入pLVX-mCMV-ZsGreen-IRES-Puro慢病毒载体中,在JM109感受态细胞中进行扩增,测序及鉴定合格后转染293T细胞,包装成过表达慢病毒颗粒并测定病毒滴度.将获得的重组慢病毒转染平滑肌细胞系,倒置荧光显微镜下观察细胞形态并计算转染效率,嘌呤霉素筛选获得稳转平滑肌细胞株.③将平滑肌细胞分为3组,分别为对照组、空载组和FNDC5过表达组,Real-time PCR和Western blot检测各组平滑肌细胞FNDC5 mRNA及蛋白表达,CCK-8和细胞划痕实验检测各组平滑肌细胞增殖活性及迁移能力.结果 与结论:①成功构建FNDC5过表达慢病毒,并得到稳定转染的平滑肌细胞株,平滑肌细胞转染效率为86％;②与对照组、空载组比较,FNDC5过表达组FNDC5 mRNA及蛋白表达显著升高(P＜0.001);③与空白组、空载组比较,FNDC5过表达组细胞增殖活性、迁移率明显下降(P＜0.05);④结果显示,得到FNDC5稳定转染的平滑肌细胞株,FNDC5过表达可抑制平滑肌细胞增殖与迁移.
关键词：Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5FNDC5慢病毒转染血管平滑肌细胞细胞增殖细胞迁移
分类号：R459.9(治疗学)R318(医用一般科学)R543(心脏、血管（循环系）疾病)
资助基金：国家自然科学基金(81660083)
论文发表日期：2021-12-11
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 5670-5675 )
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