人尿源性干细胞来源外泌体的提取及鉴定
王帅1
李超然2
章茜茹3
黄桂林4
1.遵义医科大学口腔医学院,贵州省遵义市 5630002.同济大学附属东方医院,上海市 3100003.贵州中医药大学第一附属医院,贵州省贵阳市 5500024.遵义医科大学附属口腔医院,贵州省遵义市 563003
摘要：背景:近年来研究发现,干细胞所发挥的组织修复与再生功能在很大程度上是通过旁分泌作用实现的,外泌体作为其中一种重要的旁分泌因子,已经被证实在心脏、神经、骨、视网膜损伤修复及再生方面发挥重要作用,研究人员也在寻找更好的干细胞来源外泌体.目的:提取并鉴定人尿源性干细胞来源外泌体.方法:收集健康成年男性新鲜尿液,采用贴壁培养法分离得到人尿源性干细胞,对其进行培养、传代.流式细胞术鉴定其表面标记物,体外定向诱导其向成骨细胞、脂肪细胞分化,分别采用茜素红、Von Kossa和油红O染色进行鉴定.采用改良超高速离心法从人尿源性干细胞培养上清中提取外泌体,透射电镜观察其形态,纳米颗粒跟踪分析其大小及浓度,蛋白质免疫印迹法检测其特异性蛋白CD9、CD63和HSP70的表达.结果 与结论:①人尿源性干细胞培养3-5 d后开始贴壁生长,细胞在原代时呈"铺路石"样,第1代和第2代细胞呈"米粒"样,传至第3代后逐渐呈"纺锤形"或"梭形";流式细胞仪检测结果显示人尿源性干细胞阳性表达间充质干细胞的特异表面标志物CD44、CD73、CD90和CD105;人尿源性干细胞经成骨、成脂诱导培养后能成功分化为成骨细胞、脂肪细胞;②经过低速、高速、超高速序列离心方法,从人尿源性干细胞的条件培养基中提取外泌体,透射电镜观察呈圆形或者椭圆形膜性囊泡样,形似"茶托",大小主要集中在64-141 nm之间,蛋白质免疫印迹分析显示人尿源性干细胞来源外泌体表达CD9、CD63和HSP70蛋白;③该研究证实了改良超高速离心法提取人尿源性干细胞外泌体的可行性.
关键词：干细胞人尿源性干细胞外泌体超高速离心成骨分化粒径纳米
分类号：R459.9(治疗学)R318(医用一般科学)Q2-33(细胞生物研究方法)
资助基金：国家自然科学基金(81860193)
论文发表日期：2022-05-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 2056-2061 )
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