血管内皮细胞PDHA1基因特异性敲除鼠构建及其表型功能鉴定
郝玮1
孙岳1
杨安宁2
刘太阳1
宝瑞1
刘耀阳1
王秋实1
王梦1
畅思容1
李媛媛1
刘志宏1
1.宁夏医科大学,公共卫生与管理学院,宁夏回族自治区银川市 7500042.宁夏医科大学,基础医学院,宁夏回族自治区银川市 750004
摘要：背景:PDHA1基因是有氧呼吸链中不可或缺的基因,血管内皮细胞的能量代谢与很多疾病有关.构建血管内皮细胞PDHA1基因敲除鼠,有助于研究能量代谢在血管内皮细胞相关疾病中的作用.目的:繁育血管内皮细胞PDHA1基因特异性敲除小鼠并进行表型鉴定.方法:将PDHA1(iΔEC/iΔEC)小鼠与PDHA1(iΔEC/-)小鼠进行合笼繁育,获得更多的PDHA1(iΔEC/iΔEC)小鼠进行后续实验.利用PCR和琼脂糖凝胶电泳进行基因鉴定,然后利用RT-PCR和Western blot检测敲除PDHA1后与能量代谢相关基因的mRNA及蛋白表达,利用VE-Cadherin与PDHA1双重免疫荧光判断PDHA1基因条件性敲除后PDHA1蛋白表达变化.结果 与结论:利用琼脂糖凝胶电泳实验成功检测出子代小鼠基因型,包括PDHA1(iΔEC/iΔEC)15只和PDHA1(iΔEC/-)2只小鼠;RT-PCR和Western Blot检测发现PDHA1在转录水平和翻译水平都发生了下降,参与糖酵解途径的HK2蛋白及mRNA表达上升,参与有氧磷酸化途径方向IDH蛋白及mRNA表达下降;VE-cadherin和PDHA1双重免疫荧光共染色检测到PDHA1的表达下降.
关键词：PDHA1基因双重免疫荧光CreERT2基因表型验证基因鉴定能量代谢血管内皮细胞肺纤维化
分类号：R459.9(治疗学)R332(人体生理学)R135.2(劳动卫生)
资助基金：国家自然科学基金(81960018)国家自然科学基金(82060264)国家自然科学基金(82160088)宁夏高等学校科学研究项目(NGY2020031)
论文发表日期：2022-07-11
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 3207-3211 )
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