胶原蛋白海绵的制备及安全性评价

刘超远; 高田芳; 黄伟

摘要：背景:自动物体提取胶原蛋白并经冻干工艺得到胶原蛋白海绵,可赋予材料良好的临床止血性能,同时可实现在机体中的自身降解,但所提取的胶原蛋白也存在携带病毒及体内免疫原性风险.经过酸酶结合工艺处理去除胶原端肽、并灭活病毒,实现材料良好的生物安全性.目的:规模化生产制备胶原蛋白海绵,并对其进行免疫原性及病毒灭活有效性的整体生物安全性评价.方法:通过酸酶结合法从牛跟腱中提取胶原蛋白,经冷冻干燥工艺得到胶原蛋白止血海绵.将1,4片胶原蛋白海绵分别埋植于Wistar大鼠腹部皮下,埋植1,4,8,12周后对大鼠体征、血常规、T淋巴细胞增殖、免疫球蛋白含量等指标进行检测.取3批次的牛跟腱粉碎后中间体样品,分别浸泡于伪狂犬病毒、水泡性口炎病毒、猪细小病毒和猪脑心肌炎病毒液中,检验酸酶结合法处理的胶原蛋白海绵对病毒灭活的有效性.结果与结论:①于无菌车间规模化提取胶原蛋白,经冷冻干燥后得到胶原蛋白海绵,并完成内外包装和辐照灭菌的生产全过程;②埋植1,4片胶原蛋白海绵大鼠的生理体征、血常规、NK细胞杀伤活性、T淋巴细胞增殖状态及免疫球蛋白含量等指标均表现正常;③酸酶法工艺灭活的3批次牛跟腱粉碎后中间体样品均无可以检测到的病毒,可使病毒滴度下降4个logs以上;同时,对未能检测到的病毒滴度样品进行了敏感细胞接种盲传3代,结果未显示细胞病变;④免疫原性和病毒灭活检测表明,所制备的胶原蛋白止血海绵有着良好的生物安全性.