柚皮苷调控小胶质细胞极化防治实验性自身免疫性脑脊髓炎

曾春蓉; 刘梦兰; 谢阳; 李作孝

摘要：背景:小胶质细胞M1/M2表型失衡在许多神经变性疾病及自身免疫性疾病进展中发挥着重要作用,调节小胶质细胞表型转化是免疫治疗的靶点.目的:探讨柚皮苷防治实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的疗效,以及其通过STAT1通路和自噬调控小胶质细胞极化的作用.方法:将50只C57BL/6雌性小鼠随机分成5组,即空白对照组、模型组和柚皮苷低、中、高剂量组,每组10只,后4组制备实验性自身免疫性脑脊髓炎模型.柚皮苷低、中、高剂量组分别给予10,20,40 mg/(kg·d)柚皮苷腹腔注射,空白对照组和模型组腹腔注射等量生理盐水,连续10 d.观察小鼠发病情况,利用苏木精-伊红染色及劳克坚牢蓝染色行脊髓组织病理观察,免疫荧光法观察脊髓组织中小胶质细胞激活标志物Iba-1及自噬标志物LC3表达,Western blot法检测脊髓组织中STAT1、Beclin1、p62、LC3、CD16、CD206、诱导型一氧化氮合酶、Arg-1蛋白水平,实时荧光定量PCR法检测脊髓组织中STAT1 mRNA水平.结果与结论:①空白对照组小鼠均未发病,其余组小鼠均有不同程度发病,与模型组比较,柚皮苷各剂量组小鼠发病潜伏期延长(P<0.01)、高峰期推迟(P<0.01或P<0.05)、高峰期神经功能障碍评分降低(P<0.01或P<0.05),且柚皮苷剂量越大,小鼠症状越轻;②在发病高峰期,模型组脊髓组织炎症细胞浸润及脱髓鞘情况较空白对照组明显,脊髓组织炎症评分及脱髓鞘评分增加(P<0.01);而柚皮苷各剂量组脊髓组织炎症细胞浸润及脱髓鞘情况较模型组减轻,脊髓组织炎症评分及脱髓鞘评分下降(P<0.01),柚皮苷剂量越大,效果越明显(P<0.01或P<0.05);③模型组小鼠脊髓组织中Iba-1及LC3阳性表达区域平均吸光度值增加(P<0.01),而柚皮苷各剂量组中Iba-1及LC3阳性表达区域平均吸光度值减少(P<0.01或P<0.05),且柚皮苷剂量越大,减少越明显(P<0.01或P<0.05);④与空白对照组比较,模型组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增加,LC3、Beclin1、STAT1及mRNA、CD16、诱导型一氧化氮合酶水平增加(P<0.01或P<0.05),p62、Arg-1、CD206水平降低(P<0.01或P<0.05);与模型组比较,柚皮苷各剂量组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值下降,LC3、Beclin1、STAT1及mRNA、CD16、诱导型一氧化氮合酶水平降低(P<0.01或P<0.05),p62、Arg-1、CD206水平增加(P<0.01或P<0.05),且剂量越大效果越明显(P<0.01或P<0.05);⑤提示柚皮苷对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠发病具有防治作用,且呈剂量依赖性;其作用可能是通过下调STAT1通路和抑制自噬调控实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠小胶质细胞极化、纠正M1/M2型小胶质细胞失衡有关.