负载虎杖苷的胶原/硫酸肝素支架修复大鼠脊髓损伤

刘康; 王勇平; 左可斌; 杨海涛; 贾斌

摘要：背景:目前关于虎杖苷神经保护作用的研究逐渐成为神经科领域关注的热点,研究方向多集中在缺血性脑血管病方面,在脊髓损伤修复中应用的研究较少.目的:以胶原/硫酸肝素支架为载体,将虎杖苷局部应用于脊髓损伤部位,观察修复效果.方法:①制备胶原/硫酸肝素支架与负载0.5,1,1.5 mmol/L虎杖苷的胶原/硫酸肝素支架,将第3代大鼠神经干细胞分别接种于4种支架上,采用CCK-8法检测细胞增殖情况;在诱导神经干细胞的神经向分化过程中,采用免疫荧光染色与RT-PCR检测胶质纤维酸性蛋白、Tuj-1和Oligo的表达.②建立成年雄性SD大鼠半横切脊髓损伤模型,分3组,模型对照组(n=10)不植入任何材料,对照组(n=10)植入胶原/硫酸肝素支架,实验组(n=10)植入1 mmol/L虎杖苷/胶原/硫酸肝素支架;同时设立假手术组(n=10).术后8周内,利用BBB评分测试大鼠右后肢运动功能;术后第8周取材,进行脊髓组织学观察、免疫组化分析与Western Blot检测.结果与结论:①培养第3,7天时,负载1 mmol/L虎杖苷支架上的细胞增殖吸光度值高于其他3组支架(P<0.05).②诱导7 d后的免疫荧光染色显示,负载1,1.5 mmol/L虎杖苷支架组的胶质纤维酸性蛋白表达少于其他两组,Oligo与Tuj-1表达多于其他两组.③RT-PCR检测结果显示,负载1,1.5 mmol/L虎杖苷支架组的胶质纤维酸性蛋白mRNA表达水平低于其他两组(P<0.05),4组间的Tuj-1 mRNA表达水平无明显差异,负载1 mmol/L虎杖苷支架组的Oligo mRNA表达水平高于其他3组(P<0.05).④脊髓损伤修复实验显示,实验组术后2-8周的BBB评分始终高于模型对照组与对照组(P<0.05);苏木精-伊红染色显示,对照组与观察组脊髓缺损部位被支架填充,组织间的间隙小于模型对照组,其中观察组的组织连续性与组织间隙改善好于对照组;免疫组化与Western Blot检测显示,实验组的神经丝蛋白200的表达高于对照组、模型对照组(P<0.05),胶质纤维酸性蛋白的表达低于对照组、模型对照组(P<0.05).⑤结果表明,负载虎杖苷的胶原/硫酸肝素支架可促进脊髓损伤的修复.