老年小鼠踝关节软骨细胞体外分离及培养鉴定
贾彩霞1
何斯2
哈小琴3
1.兰州大学公共卫生学院,甘肃省兰州市 730000;中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院,甘肃省兰州市 730050;甘肃省干细胞与基因药物重点实验室,甘肃省兰州市 7300502.中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院,甘肃省兰州市 730050;甘肃省干细胞与基因药物重点实验室,甘肃省兰州市 730050;兰州大学第二临床医学院,甘肃省兰州市 7300003.中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院,甘肃省兰州市 730050;甘肃省干细胞与基因药物重点实验室,甘肃省兰州市 730050
摘要：背景:老年小鼠的关节软骨本身存在一定的磨损,提取难度较大;尤其是踝关节等难以分离关节软骨面的小关节软骨细胞的提取方法更加少见.目的:探究实验室改良两步酶消化法提取老年小鼠踝关节软骨细胞的效果,体外培养观察并评价其生物学特性.方法:选取46周龄老年BALB/c雄性小鼠踝关节,通过实验室改良的0.25％胰酶EDTA、2 g/LⅡ型胶原酶两步酶消化法顺序进行分离提取及体外培养.使用倒置显微镜观察细胞生长形态,锥虫蓝染色并计数原代贴壁细胞,甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫荧光染色,二甲基亚甲基蓝显色法测定原代贴壁细胞培养液和消化液中硫酸糖胺多糖水平,CCK-8试剂盒检测软骨细胞增殖进行软骨细胞生物学特性鉴定及评价.结果 与结论:①关节软骨经两步酶消化后,细胞全部解离释放,老年小鼠每个踝关节平均收获9×105个原代贴壁细胞;原代及第1代、第2代细胞贴壁形态为梭形和多角形;②细胞甲苯胺蓝染色可见蓝紫色易染颗粒,Ⅱ型胶原免疫荧光染色可见红色荧光阳性表达;③原代细胞培养液和消化液中硫酸糖胺多糖分别为(42.41±15.00),(65.63±10.00)mg/L;阴性对照中硫酸糖胺多糖分别为(0.35±3.78),(0.21±2.56)mg/L;④原代细胞第6天细胞数量达到最大,第1代和第2代细胞第5天达到最大,同一时间点,第1代细胞的细胞活力大于第2代细胞和原代细胞;⑤结果证实:实验室改良的两步酶消化法可成功分离老年小鼠踝关节软骨细胞,贴壁细胞纯度高、数量多,可成功合成和分泌Ⅱ型胶原及蛋白聚糖,具有良好的生物学特性,其中第1代软骨细胞的活力最高,第2代次之,可用于实验研究.
关键词：老年小鼠踝关节软骨细胞酶消化法细胞培养
分类号：R446(诊断学)R496(康复医学)R318(医用一般科学)
资助基金：甘肃省拔尖领军人才培养(2020808)中央高校基本科研业务费项目(31920200020)
论文发表日期：2022-11-11
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 5097-5101 )
英文信息