建立并鉴定一种基于人诱导多能干细胞的肝脏细胞定向分化实验方案
黄文俊
周亚飞
王洁
李环
张艳敏
周锐
陕西省儿童疾病精准医学重点实验室,陕西省西安市 710002;西安市儿童健康与疾病重点实验室,陕西省西安市 710002;陕西省儿科疾病研究所,陕西省西安市 710002;西安市儿童医院,陕西省西安市 710002;西安交通大学附属儿童医院,陕西省西安市 710002
摘要：背景:人诱导多能干细胞是一种与胚胎干细胞特性高度类似的多能干细胞类型,具备三胚层分化潜能和持续自我更新能力.将人诱导多能干细胞定向分化成具备功能的肝脏细胞对临床肝脏替代治疗意义重大.目的:建立一种高效的基于人诱导多能干细胞的肝脏细胞定向分化实验方案.方法:利用明场显微镜、免疫荧光对人诱导多能干细胞特性进行鉴定.通过转录因子重组蛋白手段时序性调控不同信号通路,即在第0,5,10,15天顺序加入激活素A、成纤维细胞生长因子4/骨形态发生蛋白4、肝细胞生长因子、肿瘤抑制因子M,使多能干细胞经历终末内皮层、肝内胚层、肝母细胞(肝脏前体细胞)最终分化成为有功能的肝脏细胞.利用明场显微镜、实时定量PCR(qPCR)、ELISA动态观察不同阶段形态特征和分子标记物.结果 与结论:①所使用的人诱导多能干细胞具备经典的诱导多能干细胞形态特征并且高表达诱导多能干细胞特异标记蛋白(SSEA4、SOX2、OCT4);②人诱导多能干细胞发生了终末内胚层、幼稚肝细胞、肝脏细胞不同阶段形态转变;③qPCR结果显示,随着肝细胞分化进展,诱导多能干细胞特异标记物(OCT4)显著下调,终末内胚层(GCS、CXCR4)和肝脏内胚层标记物(HNF4α、HNF1β)则呈现先升高再下调趋势,而肝脏细胞标记物(CYP34A、ALB)则呈现出逐渐递增趋势;④ELISA结果进一步显示,诱导15 d以后的肝脏细胞开始具备肝特异蛋白(白蛋白、尿素)分泌功能,并且随着时间延长其分泌功能进一步增加;⑤上述结果提示,成功建立人诱导多能干细胞向肝脏细胞定向分化的实验方案,为未来临床肝脏细胞替代治疗提供实验基础.
关键词：人诱导多能干细胞肝脏细胞分化终末内胚层肝脏内胚层肝母细胞
分类号：R459.9(治疗学)R318(医用一般科学)R-331(实验医学、医学实验)
资助基金：国家自然科学基金(81974014)西安市卫健委卫生科研人才项目(2022ms08)
论文发表日期：2023-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 28-33 )
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