一种人诱导多能干细胞向内皮细胞定向分化方案的建立及鉴定
黄文俊
王洁
周亚飞
李环
蒋丛姗
张艳敏
周锐
陕西省儿童疾病精准医学重点实验室,陕西省西安市 710002;西安市儿童健康与疾病重点实验室,陕西省西安市 710002;陕西省儿科疾病研究所,陕西省西安市 710002;西安市儿童医院,陕西省西安市 710002;西安交通大学附属儿童医院,陕西省西安市 710002
摘要：背景:人诱导多能干细胞是一种与胚胎干细胞性状高度类似的多能干细胞,其具备三胚层分化潜能和持续自我更新能力,因此能够为临床细胞替代治疗提供足量目的细胞.目的:构建并鉴定一种高效的基于人诱导多能干细胞的内皮细胞定向分化实验方案.方法:采用免疫荧光技术对人诱导多能干细胞干性和增殖活性进行鉴定.采用转录因子重组蛋白和小分子化合物时序性调控系列信号通路,即在第0,1,2,5天顺序加入激活素A、GSK通路抑制剂CHIR99021/骨形态发生蛋白4、碱性成纤维细胞生长因子/血管内皮生长因子/骨形态发生蛋白4、碱性成纤维细胞生长因子/血管内皮生长因子/CHIR99021,人诱导多能干细胞经历心脏中胚层、内皮前体细胞命运转变并最终分化成为有功能的内皮细胞.采用明场显微镜、实时定量PCR、免疫荧光动态观察不同阶段细胞形态特征和分子标记物,采用血管成环实验验证内皮细胞的体外血管形成功能.结果 与结论:①人诱导多能干细胞内源性高表达诱导多能干细胞干性特异标记物(OCT4、NANOG、SSEA4)和增殖标记物(Ki67);②开始分化后的人诱导多能干细胞经历了诱导多能干细胞、心脏中胚层、内皮前体细胞、内皮细胞等阶段显著的形态改变;③qPCR结果显示,随着分化进展,内皮前体细胞标记物(KDR、CD34)呈现先升高再下调趋势,而内皮细胞标记物(VE-CADHERIN、ICAM1、PECAM1)则呈现出逐渐递增趋势,免疫荧光在蛋白水平进一步证实了内皮细胞标记物的表达递增趋势;④血管成环实验显示,内皮细胞血管形成数量随血管内皮生长因子质量浓度增加而增多;⑤综上提示:成功建立了人诱导多能干细胞定向分化内皮细胞的实验方案,有望为未来血管构建提供细胞基础和实验依据.
关键词：人诱导多能干细胞内皮细胞分化信号通路内皮前体细胞
分类号：R459.9(治疗学)R318(医用一般科学)R-331(实验医学、医学实验)
资助基金：国家自然科学基金(81974014)西安市卫生健康委员会卫生科研人才项目(2022ms08)西安市卫生健康委员会卫生科研人才项目(2022ms09)西安市儿童医院院级课题(2021A01)西安市儿童医院院级课题(2021B02)
论文发表日期：2023-04-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 1553-1559 )
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