无动物源成分纯细胞因子从深低温冻存脐血中高效扩增NK细胞
刁小娟1
石超群1
李栋2
王帅1
肖春1
刘国军1
曲廷瑜1
杨卫娟1
贾晓鹏1
1.山东省齐鲁干细胞工程有限公司,山东省济南市 250100;山东省脐带血造血干细胞库,山东省济南市 2501002.山东大学齐鲁医院低温医学研究室,山东省济南市 250012
摘要：背景:从深低温冻存脐血中获得大量高纯度无滋养层细胞、无动物源成分的NK细胞,以便更好地开展NK细胞杀伤肿瘤的实验研究,此次研究通过使用NK扩增培养试剂盒和血清替代物,以获得安全、高效的体外扩增培养NK细胞的方法.目的:建立一种从冷冻脐血中采用纯细胞因子扩增NK细胞的技术体系并证明其体外杀瘤能力.方法:解冻液氮存储的冻存脐血,优化复苏体系,采用Ficoll密度梯度离心的方法收集脐血单个核细胞,接种于预先铺板的T175培养瓶中,采用细胞因子试剂盒+血清替代物法培养21 d后收集细胞并计数,应用流式细胞术检测细胞中CD3-CD56+的比例,并将所得数据与K562滋养层细胞+胎牛血清的培养方法进行对比分析.同时以髓系白血病细胞K562为靶细胞,采用CCK-8试剂盒检测不同效靶比NK细胞杀伤K562细胞的作用.最后进行了12 h内的模拟储存运输实验,采用流式检测CD3-CD56+的比例变化,并使用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率.结果 与结论:①采用K562滋养层细胞+胎牛血清的培养方法扩增培养14 d,细胞扩增(51.47±4.28)倍;采用细胞因子试剂盒+血清替代物法扩增培养21 d,细胞数量5×109以上,细胞扩增(328.32±116.36)倍,细胞扩增倍数明显升高,2种方法获得的CD3-CD56+纯度比例均在80％以上,未见明显差异;②纯细胞因子方法培养后的NK细胞对K562细胞的杀伤效果(效靶比=10:1)达80％以上;③在12 h的模拟储运实验中,CD3-CD56+的比例变化不明显,直至第12小时,NK细胞凋亡率<7％;④结果表明:优化复苏体系和纯细胞因子扩增方法可以高效培养出高纯度的NK细胞,同时具有有效杀伤K562肿瘤细胞的能力,且经过12 h储运后仍然具有良好的细胞纯度和较低的凋亡率.
关键词：冷冻脐血NK细胞因子扩增细胞毒性凋亡率配型临床应用
分类号：R459.9(治疗学)R392(医学免疫学)R331.1(人体生理学)
资助基金：山东省重点研发计划(重大科技创新工程)项目(2019JZZY011012)
论文发表日期：2023-04-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1572-1577 )
英文信息