新生SD大鼠大脑皮质神经元的原代培养及鉴定
王京
卢思彤
吴印林
刘玉东
邹维艳
孙美群
蚌埠医学院组胚教研室,安徽省蚌埠市 233030
摘要：背景:培养神经元的质量是研究中枢神经系统疾病的关键所在,但培养方法一直没有统一的标准.目的:探究取材部位及阿糖胞苷处理对原代培养神经元活性、纯度及成熟度的影响.方法:选取新生24 h内的SD乳鼠,取大脑皮质表面2.0-3.0 mm处细胞,培养后24,48,72 h,用5μmol/L或10μmol/L阿糖胞苷处理48 h;另取全部大脑皮质细胞,培养后48 h用5μmol/L阿糖胞苷处理48 h.培养至第7天,倒置显微镜下观察细胞形态,采用CCK-8法检测阿糖胞苷对神经元活性的影响,免疫荧光和Western blot检测神经元的纯度及成熟度.结果 与结论:①倒置显微镜:10μmol/L阿糖胞苷24,48,72 h组神经元密度分别低于同时间下的5μmol/L阿糖胞苷组,该6组神经元突起相互之间均可连接成紧密的网状结构,神经元胞体丰满并充满折光特性;全皮质组细胞密度低于正常对照组,并可明显观察到非神经元;②CCK-8检测:各阿糖胞苷组细胞活性均低于正常对照组(P<0.001),10μmol/L阿糖胞苷24,48,72 h组神经元活性低于同时间下的5μmol/L阿糖胞苷组(P<0.05),5μmol/L阿糖胞苷24 h组神经元活性低于5μmol/L阿糖胞苷48,72 h组(P<0.01);③免疫荧光染色:各阿糖胞苷组神经元纯度大于正常对照组、全部皮质组(P<0.001),各阿糖胞苷组神经元纯度无差异;④Western blot检测神经元特异性烯醇化酶蛋白表达:各阿糖胞苷组神经元成熟度高于正常对照组(P<0.05),其中以5μmol/L阿糖胞苷48 h组成熟度最高;⑤结果表明:取新生24 h内大鼠大脑皮质表面2.0-3.0 mm处皮质,培养后48 h加入5μmol/L阿糖胞苷处理得到的神经元活性、成熟度和纯度较好.
关键词：阿糖胞苷大脑皮质神经元原代培养神经元活性大鼠
分类号：R459.9(治疗学)R338(人体生理学)R392-3(医学免疫学)
资助基金：安徽省高等学校自然科学研究重大项目(KJ2019ZD26)慢性疾病免疫学基础与临床安徽省重点实验室开放课题(KLICD-2022-Z4)
论文发表日期：2023-05-21
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 2344-2349 )
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