miR-29a调控水通道蛋白4抑制过氧化氢诱导的星形胶质细胞凋亡
朱琳1
郭世武2
刘锦波2
邹红军2
1.常州市第一人民医院,心内科,江苏省常州市 2130032.常州市第一人民医院,脊柱外科,江苏省常州市 213003
摘要：背景:一些研究已经证实了miR-29a、水通道蛋白4在星形胶质细胞损伤过程中的作用,但其是否存在相互作用以及分子机制尚未见报道.目的:研究miR-29a调控水通道蛋白4表达对过氧化氢诱导星形胶质细胞损伤的影响.方法:①以小鼠原代培养的星形胶质细胞为研究对象,用不同浓度的过氧化氢诱导小鼠星形胶质细胞损伤反应,细胞分为对照组、过氧化氢组、过氧化氢+空载体组、过氧化氢+miR-29a过表达组.采用MTT法检测小鼠星形胶质细胞存活率;Western blot法检测小鼠星形胶质细胞凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、cleaved-Caspase-3)、水通道蛋白4和胶质纤维酸性蛋白的蛋白表达水平;实时定量PCR检测小鼠星形胶质细胞中miR-29a的表达水平;流式细胞仪检测小鼠星形胶质细胞凋亡水平.②将12只雌性BALB/c小鼠随机分为空载体组、过表达miR-29a组,每组6只.制备小鼠T10脊髓撞击损伤动物模型,建模后分别注射以下重组慢病毒(空载体、miR-29a过表达载体).术后第7天,采用免疫组织荧光染色检测小鼠脊髓损伤部位水通道蛋白4和胶质纤维酸性蛋白表达水平.结果 与结论:①过氧化氢诱导后星形胶质细胞活性下降,促凋亡相关蛋白Bax、cleaved-caspase-3水平升高,抑凋亡相关蛋白Bcl-2水平降低,且具有浓度依赖效应.在过氧化氢诱导损伤的小鼠星形胶质细胞中,miR-29a表达降低而水通道蛋白4和胶质纤维酸性蛋白的蛋白表达显著增加;过表达miR-29a能抑制水通道蛋白4的蛋白表达,抑制细胞凋亡.信息学软件预测水通道蛋白4可能是miR-29a的下游靶基因.②在小鼠脊髓撞击损伤模型中,与注射空载体病毒组比较,损伤部位过表达miR-29a能抑制水通道蛋白4和胶质纤维酸性蛋白的蛋白表达.③以上研究结果表明,miR-29a调控水通道蛋白4能够抑制过氧化氢诱导的星形胶质细胞凋亡.
关键词：miRNAs水通道蛋白4星形胶质细胞凋亡慢病毒过氧化氢
分类号：R459.9(治疗学)R318(医用一般科学)R826.64(军事医学)
资助基金：江苏省卫生健康委医学科研项目(Z2019014)常州市应用基础研究计划(CJ20220108)常州市青苗工程培养对象(CZQM2020046)常州市卫健委青年人才科技项目(QN201704)
论文发表日期：2023-07-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 2993-2998 )
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