破骨细胞分化过程中丙酮酸的作用
刘官娟1
夏千禧1
宋娜1
霍花1
洪伟2
廖健1
1.贵州医科大学口腔医学院/ 附属口腔医院,贵州省贵阳市 5500042.贵州医科大学分子生物学重点实验室,贵州省贵阳市 550004
摘要：背景:糖酵解在破骨细胞分化过程中起关键作用,成熟破骨细胞骨吸收主要依赖于糖酵解.丙酮酸作为糖酵解的终末产物,在三大营养物质的代谢中起重要的枢纽作用.目的:探讨丙酮酸对破骨细胞分化的影响.方法:采用CCK-8法检测不同浓度(0.1,1,10,20,30,50 mmol/L)丙酮酸对RAW264.7细胞活性的影响,筛选出安全浓度丙酮酸.将RAW264.7细胞分组干预:空白对照组加入完全培养基(含体积分数10％胎牛血清、1％双抗的α-MEM培养基),对照组加入含核因子κB受体活化因子配体的完全培养基,实验组加入核因子κB受体活化因子配体与不同浓度丙酮酸的完全培养基,分别进行抗酒石酸酸性磷酸酶染色、细胞骨架纤维性肌动蛋白染色、RT-qPCR检测、Western blot检测与骨吸收陷窝实验.结果 与结论:①CCK-8检测显示,丙酮酸对RAW264.7细胞的最大半数抑制浓度为8.923 mmol/L,后续实验选择0.1,1,5 mmol/L为安全浓度;②抗酒石酸酸性磷酸酶染色显示,1 mmol/L丙酮酸促进RAW264.7细胞向破骨细胞分化;③细胞骨架纤维性肌动蛋白染色显示,1 mmol/L丙酮酸促进破骨细胞肌动蛋白环的形成,5 mmol/L丙酮酸不影响破骨细胞分化也不干扰破骨细胞肌动蛋白环的形成;④RT-qPCR检测显示,安全浓度范围内的丙酮酸对破骨分化相关基因核转录因子活化T细胞核因子C1、抗酒石酸酸性磷酸酶的mRNA相对表达量无明显影响;⑤Western blot检测显示,0.1,1 mmol/L丙酮酸对破骨分化相关蛋白核转录因子活化T细胞核因子C1的表达量无明显影响,5 mmol/L丙酮酸抑制核转录因子活化T细胞核因子C1蛋白的表达,0.1,1,5 mmol/L丙酮酸促进破骨分化相关蛋白c-fos的表达;⑥1 mmol/L丙酮酸促进破骨细胞骨吸收陷窝的形成;⑦结果表明,1 mmol/L丙酮酸在体外对核因子κB受体活化因子配体诱导的RWA264.7细胞向破骨细胞分化具有促进作用.
关键词：破骨细胞糖酵解丙酮酸骨代谢骨稳态
分类号：R459.9(治疗学)R329.2(人体形态学)R589.5(内分泌腺疾病及代谢病)
资助基金：国家自然科学基金(82060207)贵州省卫生健康委科学技术基金项目(gzwkj2022-165)大学生创新创业训练项目(202110660022)
论文发表日期：2023-11-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 5015-5021 )
英文信息