α-突触核蛋白在帕金森病患者血清中的磷酸化修饰
齐雪1
李家慧1
朱远峰1
禹璐1
王鹏2
1.北华大学基础医学院,人体解剖学教研室,吉林省吉林市 1320132.北华大学基础医学院,人体解剖学教研室,吉林省吉林市 132013;北华大学基础医学院,神经退行性疾病研究室,吉林省吉林市 132013
摘要：背景:α-突触核蛋白翻译后修饰后形成的聚集体是帕金森病主要的病理学改变.α-突触核蛋白可通过血脑屏障由中枢进入外周血分布至机体各部,这成为帕金森病病理播散的重要途径.因此研究血液中的α-突触核蛋白变化对揭示帕金森病的机制以及早期诊断尤为重要.目的:拟分析α-突触核蛋白在帕金森病患者血清中的磷酸化修饰位点及生成聚集体间的结构稳定性的差异.方法:构建重组人α-突触核蛋白原核表达系统,亲和层析法纯化蛋白,采用SDS-PAGE电泳和Western blot方法检测α-突触核蛋白单体纯度和特异性.收集北华大学附属医院神经内科住院的26例帕金森病患者血清和26例正常人血清,完成各组血清中α-突触核蛋白聚集体的制备;采用质谱SWATH方法检测帕金森病患者血清中α-突触核蛋白发生磷酸化修饰的修饰位点,并对不同位点的蛋白聚集体进行定量分析.将不同磷酸化修饰的蛋白聚集体免疫亲和层析法纯化后,Western blot方法检测帕金森病患者血清中各磷酸化修饰后聚集体的稳定性.结果 与结论:①实验通过SDS电泳和Western blot方法检测显示得到纯度较高、特异性较高的α-突触核蛋白单体.②质谱SWATH分析结果显示,在帕金森病患者和正常人血清中均发生磷酸化修饰,其中帕金森病患者血清中磷酸化修饰的位点明显多于正常人,帕金森病患者血清中发生磷酸化的位点有丝氨酸(Serine,Ser)87、Ser129、酪氨酸(L-tyrosine,Tyr)125、Tyr133和Tyr136等.③帕金森病患者血清中孵育后的α-突触核蛋白中,Ser129位点磷酸化修饰占总磷酸化的53.65％,Tyr125,Tyr133,Tyr136和Ser87磷酸化各为17.21％,15.79％,15.79％,9.52％和1.03％.④Western blot检测结果显示,帕金森病患者血清中Ser129位点磷酸化修饰后形成的聚集体较Tyr125,Tyr133和Tyr136更为稳定.⑤上述数据证实,帕金森病患者血清中的α-突触核蛋白磷酸化修饰位点数量明显多于正常人;在诸多修饰位点中,血清α-突触核蛋白的Ser129位点经过磷酸化修饰后形成的聚集体最稳定,这可能为帕金森病早期诊断提供诊断标志物参考.
关键词：α-突触核蛋白帕金森病磷酸化血清丝氨酸酪氨酸聚集体诊断生物标志物
分类号：R459.9(治疗学)R363(病理学)R74(神经病学与精神病学)
资助基金：吉林省自然科学基金(YDZJ202201ZYTS575)吉林省卫生与健康技术创新项目(2018J083)
论文发表日期：2023-12-11
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 5577-5582 )
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