DOI: 10.12307/2023.901
慢病毒沉默Piezo1蛋白与人骨髓间充质干细胞成骨分化及TAZ的表达
韦雨柔1
田佳庆1
何宪顺1
詹芝玮1
魏腾飞1
林天烨2
何伟2
魏秋实2
1.广州中医药大学第三临床医学院,广东省广州市 510378;广东省中医骨伤研究院,广东省广州市 5103782.广东省中医骨伤研究院,广东省广州市 510378;广州中医药大学第三附属医院关节中心,广东省广州市 510378
摘要：背景:Piezo1作为机械敏感蛋白与成骨分化密切相关,TAZ也被证明参与调节成骨分化,但Piezo1调控人骨髓间充质干细胞成骨分化时TAZ是否参与其中目前尚不明确,故研究其具体机制对防治股骨头坏死具有重要意义.
目的:探讨Piezo1对人骨髓间充质干细胞成骨分化及TAZ表达的影响.
方法:构建靶向Piezo1的siRNA,转染至293T细胞,通过RT-qPCR检测其沉默效率并筛选出Piezo1-Homo-2337进行包装,使用荧光染色检测其最佳感染复数值.Piezo1沉默重组慢病毒进一步被转染至人骨髓间充质干细胞中,通过RT-qPCR、Western blot检测其沉默效果;通过茜素红染色、碱性磷酸酶活性分析、免疫荧光染色、RT-qPCR及Western blot检测分析沉默Piezo1对人骨髓间充质干细胞成骨分化能力及TAZ表达的影响.
结果与结论:①与正常组、阴性对照组比较,转染si-Piezo1后人骨髓间充质干细胞中Piezo1的mRNA及蛋白水平明显降低;②与阴性对照组比较,si-Piezo1组碱性磷酸酶活性明显降低,钙沉积明显减少;③与阴性对照组比较,si-Piezo1组成骨相关基因Runx2、OPN、DLX5、osteocalcin、β-catenin及TAZ的mRNA水平明显降低.si-Piezo1组TAZ、β-catenin的蛋白表达明显降低;相反,si-Piezo1组p-TAZ、p-β-catenin的蛋白表达明显增加;④与阴性对照组比较,免疫荧光染色结果提示si-Piezo1组人骨髓间充质干细胞中TAZ、β-catenin的表达较少;⑤结果表明Piezo1可促进人骨髓间充质干细胞的成骨分化,沉默Piezo1后人骨髓间充质干细胞的成骨能力明显降低,同时TAZ的表达也同样降低.
关键词：股骨头坏死人骨髓间充质干细胞Piezo1TAZ成骨分化
分类号：R459.9(治疗学)R318(医用一般科学)R34(基础医学)
论文发表日期：2024-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 12-19 )
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