DOI: 10.12307/2024.132
Wnt信号通路与自身免疫调节因子共同参与胚胎干细胞向胸腺上皮祖细胞的分化
文廷浩1
李远迪1
何可可1
宋雯茜1
王先斌1
高杰2
苏敏3
胡蓉3
1.贵州医科大学,基础医学院组织学与胚胎学教研室,贵州省贵阳市 5500252.贵州医科大学,基础医学院组织学与胚胎学教研室,贵州省贵阳市 550025;贵州医科大学,转化医学研究中心,贵州省贵阳市 5500253.贵州医科大学,基础医学院组织学与胚胎学教研室,贵州省贵阳市 550025;贵州医科大学,细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室,贵州省再生医学重点实验室,中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室,贵州省贵阳市 550025
摘要：背景:自身免疫调节因子(autoimmune regulator gene,Aire)及Wnt信号通路在小鼠胚胎干细胞多能性的维持及分化中都发挥着重要作用,但Wnt信号与Aire是否参与了小鼠胚胎干细胞向胸腺上皮祖细胞的分化尚未可知.
目的:探讨Wnt信号通路和自身免疫调节因子与胚胎干细胞分化的关系.
方法:采用两步分化方法定向诱导小鼠胚胎干细胞分化为内胚层再分化为胸腺上皮祖细胞,然后用Aire shRNA慢病毒感染小鼠胚胎干细胞,嘌呤霉素筛选单克隆稳定株,再采用两步分化方法进行诱导分化,分别于定向诱导分化第0,3,10天,采用细胞免疫荧光、流式细胞术、Western blot、Real-Time qPCR检测相关基因及蛋白的表达变化.
结果与结论:①定向诱导分化第0天,免疫荧光染色显示SSEA1、OCT4表达呈阳性;②定向诱导分化第3天,免疫荧光染色显示SOX17、FOXA2表达呈双阳性;③定向诱导分化第10天,流式细胞术结果显示EPCAM1、K5、K8表达呈阳性;④与未分化的小鼠胚胎干细胞相比,诱导分化的胸腺上皮祖细胞中Wnt7a、β-catenin、Gsk-3β蛋白表达升高,Aire蛋白表达降低;⑤与未分化的小鼠胚胎干细胞相比,诱导分化的胸腺上皮祖细胞中Wnt7a、β-catenin、Gsk-3β及Aire mRNA表达升高;⑥与正常培养的小鼠胚胎干细胞及其最终分化的胸腺上皮祖细胞相比,敲低Aire基因的小鼠胚胎干细胞及其最终分化的胸腺上皮祖细胞中Wnt7a、β-catenin、Gsk-3β蛋白表达水平降低.综上所述,Wnt信号通路和Aire共同参与了小鼠胚胎干细胞定向诱导分化为小鼠胸腺上皮祖细胞的过程.
关键词：Wnt信号通路自身免疫调节因子胚胎干细胞胸腺上皮祖细胞内胚层细胞
分类号：R459.9(治疗学)R318(医用一般科学)R329(人体形态学)
论文发表日期：2024-05-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1996-2001 )
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