DOI: 10.12307/2024.423
METTL3在同型半胱氨酸诱导小鼠胰岛β细胞自噬中的作用
马凌桔1
汪乐新2
迟宏扬3
张竞文2
彭红建4
高春兰5
姜怡邓2
黄晖6
杨力6
马胜超3
1.宁夏医科大学总医院老年与特需医学科,宁夏回族自治区 银川市 750004;国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室,宁夏回族自治区 银川市 7500042.国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室,宁夏回族自治区 银川市 7500043.国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室,宁夏回族自治区 银川市 750004;宁夏医科大学检验学院,宁夏回族自治区 银川市 7500044.国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室,宁夏回族自治区 银川市 750004;中南大学化学化工学院,湖南省长沙市 4100835.国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室,宁夏回族自治区 银川市 750004;银川市第一人民医院,宁夏回族自治区 银川市 7500016.宁夏医科大学总医院老年与特需医学科,宁夏回族自治区 银川市 750004
摘要：背景:高同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)血症与胰岛β细胞功能密切相关,但其具体分子机制尚不完全明确.
目的:探讨METTL3在Hcy诱导小鼠胰岛β细胞自噬中的作用.
方法:取第3,4代小鼠胰岛β细胞进行实验.①细胞模型建立和分组:对照组细胞不加入Hcy,Hcy组细胞加入浓度为100 µmol/L Hcy干预48 h;②按LipofectamineTM 2000说明书将过表达质粒Ad-METTL3及si-METTL3转染小鼠胰岛β细胞,设计3种不同干扰片段,PCR验证、筛选出干扰效率最好的干扰片段;③转染后实验分组:对照组、Hcy组、Ad-NC(阴性对照)+Hcy组、Ad-METTL3+Hcy组、si-NC(阴性对照)+Hcy组和si-METTL3+Hcy组;④采用qRT-PCR及Western blot检测细胞中METTL3及细胞自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、p62的表达;ELISA法测定胰岛素水平来评价胰岛β细胞胰岛素分泌能力;分别过表达和干扰METTL3后检测细胞自噬相关蛋白及胰岛素水平.
结果与结论:①与对照组相比,Hcy组自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ的表达水平升高(P＜0.05),而p62表达明显降低(P＜0.05),胰岛素分泌能力明显下降(P＜0.05);②与对照组相比,Hcy组中METTL3蛋白及mRNA水平表达均降低(P＜0.05);③胰岛β细胞中沉默METTL3后,Hcy进一步上调了细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ的表达(P＜0.05),而p62表达显著下降(P＜0.05),细胞中胰岛素水平增加(P＜0.05);过表达METTL3后,Hcy则使LC3Ⅱ/Ⅰ表达显著降低且p62 表达则增高(P＜0.05);④结论:METTL3参与了Hcy诱导的胰岛β细胞自噬调控,对胰岛素的分泌发挥着调控作用.
关键词：N6-甲基腺苷甲基转移酶3胰岛β细胞同型半胱氨酸细胞自噬LC3Ⅱ/Ⅰ
分类号：R496(康复医学)R318(医用一般科学)R446(诊断学)
论文发表日期：2024-09-11
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 4221-4225 )
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