DOI: 10.12307/2024.516
敲低细丝蛋白B对小鼠颅顶成骨前体细胞增殖、迁移及凋亡的影响
王茜1
俞丽2
贾麒钰3
黄金勇3
刘泽彪4
张俊3
加依达尔·地力木拉提3
谢增如3
马海蓉2
1.新疆医科大学第一附属医院,临床医学研究院,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830054;新疆医科大学第一附属医院,创伤骨科,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 8300542.新疆医科大学第一附属医院,临床医学研究院,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 8300543.新疆医科大学第一附属医院,创伤骨科,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 8300544.华北理工大学附属医院骨科,河北省唐山市 063000
摘要：背景:细丝蛋白B(FLNB)能将肌动蛋白细胞骨架交联成动态结构,对细胞的定向移动至关重要,可调控软骨细胞的增殖、分化及凋亡的发生.然而,细丝蛋白B对成骨细胞增殖、迁移及凋亡的影响尚未报道.
目的:探究细丝蛋白B对MC3T3-E1细胞的增殖、迁移及凋亡的影响.
方法:构建敲低细丝蛋白B表达的腺病毒载体(sh-FLNB1、sh-FLNB2、sh-FLNB3),感染小鼠颅顶成骨前体细胞(MC3T3-E1),嘌呤霉素药筛,通过Western Blot以及RT-PCR技术检测敲低效率,选取敲低细丝蛋白B效率最佳的MC3T3-E1细胞株作为稳转细胞株.将细胞分为Blank组、mc3t3组、sh-NC组(空载体)、sh-FLNB组(sh-FLNB慢病毒),Blank组为α-MEM完全培养基无细胞;mc3t3组为单纯α-MEM完全培养基培养;sh-NC组、sh-FLNB组为含有嘌呤霉素2.5 μg/mL的α-MEM完全培养基培养.培养3 d采用CCK-8法和划痕实验检测MC3T3-E1细胞增殖和迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;RT-PCR进一步验证细胞凋亡相关基因的表达.
结果与结论:①Western Blot及RT-PCR结果显示,sh-FLNB3组细丝蛋白B敲低效率最佳,差异有显著性意义(P<0.000 1),以此作为后续实验稳转细胞株;②CCK-8数据显示,敲低细丝蛋白B后MC3T3增殖能力显著减弱(P<0.05);③划痕实验显示,敲低细丝蛋白B后MC3T3的迁移能力明显下降;④流式细胞仪及RT-PCR显示,敲低细丝蛋白B后,MC3T3-E1细胞凋亡率增加,促凋亡因子Bax表达显著上升,抑凋亡因子Bcl-2表达下降(P<0.05);⑤结果说明,细丝蛋白B敲低可降低MC3T3-E1细胞的增殖能力,细胞迁移能力下降,并增加细胞凋亡的发生.
关键词：细丝蛋白BMC3T3-E1细胞增殖迁移凋亡
分类号：R496(康复医学)R318(医用一般科学)R446(诊断学)
论文发表日期：2024-11-11
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 5177-5181 )
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