针刀调控软骨细胞自噬维持骨关节炎软骨细胞的稳态

贾小飞; 冉丽; 马小双; 黑晓燕; 刘佳妮; 杨楠; 马海滨; 常敬鹏

doi:10.12307/2024.830

摘要：背景:针刀是治疗骨关节炎的有效方法,临床疗效肯定,但具体机制尚未明确. 目的:探讨针刀调控软骨细胞自噬维持骨关节炎软骨细胞稳态的作用. 方法:采用随机数字表法将28只新西兰兔分为对照组、骨关节炎组、针刀组和透明质酸组,每组7只,后3组保持左后肢过伸位采用石膏绷带固定6周建立膝骨关节炎模型,建模成功后,对照组与骨关节炎组不进行任何治疗,针刀组给予针刀治疗(15 min/次,1次/周),透明质酸组膝关节腔内注射透明质酸钠溶液(1次/周),均连续治疗5周.末次治疗后第2天,采用DR片观察兔膝关节宏观结构,透射电镜观察软骨细胞超微结构,Tunel染色检测软骨细胞凋亡,Western blot检测PI3K/Akt/mTOR通路及自噬相关蛋白表达. 结果与结论:①DR片显示,骨关节炎组兔膝关节间隙变窄、周围骨赘形成;相较于骨关节炎组,透明质酸组、针刀组兔膝关节间隙增宽,周围骨赘减少;②透射电镜下可见骨关节炎组兔膝关节软骨细胞内自噬体数量减少,细胞核皱缩、核膜破裂,细胞器形态不完整、细胞呈现明显死亡趋向;相较于骨关节炎组,透明质酸组与针刀组自噬体明显增加,细胞核核膜完整,细胞生存状态良好;③Tunel染色结果显示,相较于骨关节炎组,透明质酸组、针刀组凋亡软骨细胞明显减少;④Western blot检测结果显示,与对照组比较,骨关节炎组Beclin1、Cath D和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达降低(P<0.05),p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达升高(P<0.05);与骨关节炎组比较,透明质酸组和针刀组Beclin1、Cath D和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达升高(P<0.05),p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达降低(P<0.05);⑤结果表明,针刀可通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路传导来提高软骨细胞自噬水平,维持软骨细胞稳态,最终延缓软骨退变.