甲基莲心碱可抑制白细胞介素1β诱导的软骨细胞凋亡

周观金; 李亚楠; 李涛

doi:10.12307/2024.827

摘要：背景:细胞凋亡参与了关节退行性疾病的形成过程,因此抗软骨细胞凋亡可能是治疗骨关节炎的有效途径.甲基莲心碱具有抗炎、抗肿瘤、抗凋亡等广泛的药理活性,其对软骨细胞凋亡的影响尚不明确. 目的:探讨甲基莲心碱对白细胞介素1β诱导的软骨细胞凋亡的影响,阐明可能的作用机制. 方法:①取对数生长期大鼠软骨细胞,分5组干预:对照组常规培养,模型组加入白细胞介素1β处理2 h后常规培养24 h,低、中、高浓度药物组加入白细胞介素1β处理2 h后分别加入5,10,20 μmol/L甲基莲心碱培养24 h.培养结束后,检测细胞凋亡、细胞上清中软骨糖蛋白39及Ⅱ型胶原水平、凋亡相关蛋白的mRNA与蛋白表达、PERK/ATF4信号通路相关蛋白的mRNA与蛋白表达.②取对数生长期大鼠软骨细胞,分4组干预:对照组与模型组干预同上,药物组加入白细胞介素1β处理2 h后再加入20 μmol/L甲基莲心碱培养24 h,激活剂组加入白细胞介素1β处理2 h后再加入20 μmol/L甲基莲心碱、PERK/ATF4信号通路激活剂CCT020312培养24 h.培养结束后,采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,凋亡相关蛋白与PERK/ATF4信号通路相关蛋白的mRNA与蛋白表达. 结果与结论:①与对照组比较,模型组细胞凋亡率增加(P＜0.05)、增殖活性降低(P＜0.05),软骨糖蛋白39水平升高(P＜0.05),Ⅱ型胶原水平降低(P＜0.05),Bcl-2蛋白的mRNA与蛋白表达降低(P＜0.05),Bax蛋白的mRNA与蛋白表达、caspase-3 mRNA表达、Cleaved-caspase-3蛋白表达均升高(P＜0.05),PERK、ATF4、CHOP mRNA表达升高(P＜0.05),p-PERK、ATF4、CHOP蛋白表达升高(P＜0.05);与模型组比,甲基莲心碱可逆转白细胞介素1β对软骨细胞的上述影响,并且呈现浓度依赖性;②与药物组比较,激活剂组细胞凋亡率增加(P＜0.05)、增殖活性降低(P＜0.05),caspase-3、ATF4、CHOP mRNA表达升高(P＜0.05),Cleaved-caspase-3、ATF4、CHOP蛋白表达均升高(P＜0.05);③结果表明,甲基莲心碱可抑制白细胞介素1β诱导的软骨细胞凋亡、提高细胞增殖活性,作用机制可能与阻断内质网PERK/ATF4信号通路有关.