DOI: 10.12307/2025.283
SR9009联合吲哚丙酸通过核因子κB信号通路减轻C2C12成肌细胞的炎症反应
姬慧慧1
蒋旭1
张志敏1
邢运虹2
王亮亮2
李娜2
宋雨庭1
罗旭光3
崔慧林1
曹锡梅4
1.山西医科大学组织学与胚胎学教研室,山西省 晋中市 0306042.山西医科大学法医学院,山西省 晋中市 0306043.山西医科大学微生物免疫学教研室,山西省 晋中市 0306044.山西医科大学组织学与胚胎学教研室,山西省 晋中市 030604;山西医科大学山西省临床级细胞治疗转化中试基地,山西省 晋中市 030604
摘要：背景:钟基因Rev-erbα参与调节炎症,但激活Rev-erbα会增加心脑血管疾病风险.为降低相关风险,探索Rev-erbα激动剂SR9009联合其他药物来减轻骨骼肌成肌细胞炎症,奠定治疗炎症相关性骨骼肌萎缩的理论基础.
目的:探讨脂多糖刺激C2C12成肌细胞时吲哚丙酸、SR9009与核因子κB信号通路的关系.
方法:①1 μg/mL脂多糖刺激C2C12成肌细胞,RNA转录组测序结合KEGG通路富集分析信号通路.②CCK-8法检测C2C12成肌细胞活性,筛选吲哚丙酸的最佳给药浓度;然后将细胞分为空白对照组、脂多糖(1 μg/mL)组、SR9009(10 μmol/L)+脂多糖组、吲哚丙酸(80 μmol/L)+脂多糖组、吲哚丙酸+SR9009+脂多糖组,ELISA检测细胞上清液中白细胞介素6水平,RT-qPCR检测白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、Toll样受体4、CD14 mRNA表达,Western blot检测NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达.③siRNA敲减Rev-erbα,RT-qPCR评估敲减效率,检测白细胞介素6、肿瘤坏死因子α mRNA表达.
结果与结论:①与空白对照组比较,脂多糖时间依赖性抑制成肌细胞融合形成肌管,白细胞介素6、肿瘤坏死因子α mRNA表达水平升高,细胞上清液中白细胞介素6水平显著升高;KEGG通路分析支持脂多糖刺激激活核因子κB信号通路.②吲哚丙酸浓度＞80 μmol/L时抑制C2C12成肌细胞活性;吲哚丙酸和SR9009通过抑制核因子κB信号通路发挥抗炎作用,降低白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、Toll样受体4、CD14 mRNA表达水平,p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达比值低于脂多糖组.SR9009联合吲哚丙酸显著降低脂多糖诱导的炎症,Toll样受体4、CD14、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α mRNA表达水平进一步下调,p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达比值显著低于吲哚丙酸+脂多糖组和SR9009+脂多糖组.③Rev-erbα随脂多糖刺激时间依赖性升高;siRNA敲减Rev-erbα效率达58%以上,成功敲减Rev-erbα后添加脂多糖,白细胞介素6和肿瘤坏死因子α mRNA表达较脂多糖组显著上调.④结果说明,Rev-erbα可以作为调节炎症反应的靶点,SR9009靶向激活Rev-erbα联合吲哚丙酸能抑制核因子κB信号通路显著减轻C2C12成肌细胞的炎症反应,联合抗炎效果优于单独干预.
关键词：Rev-erbαSR9009吲哚丙酸脂多糖核因子κB信号通路C2C12成肌细胞
分类号：R459.9(治疗学)R318(医用一般科学)R446(诊断学)
论文发表日期：2025-02-21
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：10( 1220-1229 )
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