miR-212-3p靶向MAPK3调控骨髓间充质干细胞的衰老

钟丽颖; 李顺东; 王聪

doi:10.12307/2025.039

摘要：背景:骨质疏松症患者的骨髓间充质干细胞表现出明显衰老状态,并且细胞活性及成骨分化水平显著降低.miR-212-3p能够抑制人骨髓间充质干细胞的成骨分化,但其对骨髓间充质干细胞衰老调控的作用及机制尚不明确. 目的:研究miR-212-3p通过靶向丝裂原活化蛋白激酶3(mitogen-activated protein kinase 3,MAPK3)对骨髓间充质干细胞衰老的影响及其机制. 方法:体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,收集第3代进行以下实验:①分2组培养:对照组加入完全培养基,造模组加入含H2O2的完全培养基培养,培养72 h后,检测细胞中β-半乳糖苷酶活性、miR-212-3p和MAPK3 mRNA表达,以及MAPK3、p16和p21蛋白表达.②分3组培养:对照组、抑制物对照组、miR-212-3p抑制物组,转染24 h后,检测细胞中miR-212-3p、MAPK3 mRNA表达及MAPK3蛋白表达.③采用双荧光素酶报告基因联合qRT-PCR和Western blot验证miR-212-3p与MAPK3靶向调控作用.④分组培养:分为对照抑制物组、miR-212-3p抑制物组、miR-212-3p抑制物+干扰对照组、miR-212-3p抑制物+MAPK3干扰组,转染24 h后,检测细胞中MAPK蛋白与mRNA表达.分为对照组、H2O2组、H2O2+对照抑制物组、H2O2+miR-212-3p抑制物组、H2O2+miR-212-3p抑制物+干扰对照组、H2O2+miR-212-3p抑制物+MAPK3干扰组,细胞转染24 h后再加入H2O2培养72 h,检测细胞中衰老相关β-半乳糖苷酶活性、p16和p21蛋白表达. 结果与结论:①与对照组比较,造模组β-半乳糖苷酶活性、miR-212-3p mRNA表达及p16、p21蛋白表达升高(P<0.05),MAPK3 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05).②与对照组比较,miR-212-3p抑制物组细胞中miR-212-3p mRNA表达降低(P<0.05),MAPK3 mRNA与蛋白表达升高(P<0.05).③双荧光素酶报告基因实验证实,MAPK3是miR-212-3p下游靶基因.④与对照抑制物组比较,miR-212-3p抑制物组细胞中MAPK3 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05);与miR-212-3p抑制物组比较,miR-212-3p抑制物+MAPK3干扰组细胞中MAPK3 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05).与H2O2+对照抑制物组比较,H2O2+miR-212-3p抑制物组β-半乳糖苷酶活性降低(P<0.05);与H2O2+miR-212-3p抑制物组比较,H2O2+miR-212-3p抑制物+MAPK3干扰组β-半乳糖苷酶活性升高(P<0.05).与H2O2+对照抑制物组比较,H2O2+miR-212-3p抑制物组细胞中p16和p21蛋白表达降低(P<0.05);与H2O2+miR-212-3p抑制物组比较,H2O2+miR-212-3p抑制物+MAPK3干扰组细胞中p16和p21蛋白表达升高(P<0.05).⑤结果表明,下调miR-212-3p可抑制大鼠骨髓间充质干细胞衰老,其作用机制可能是通过靶向上调MAPK3表达实现的.