DOI: 10.12307/2025.604
基于Cre-loxP重组酶系统构建肺泡Ⅱ型上皮细胞特异性敲除SENP1基因小鼠
杨坤
章容
吴越
雷小平
谌云川
康兰
董文斌
西南医科大学附属医院儿童医学中心新生儿科,四川省出生缺陷临床医学研究中心,四川省 泸州市 646000
摘要：背景:前期在体外成功构建了SENP1基因沉默的人肺泡上皮细胞系,在细胞水平上研究了SENP1在高氧性肺损伤中的作用.
目的:基于Cre-loxP重组酶系统构建肺泡Ⅱ型上皮细胞特异性敲除SENP1基因小鼠模型.
方法:将SENP1flox/-小鼠自交得到SENP1flox/flox和SENP1flox/-小鼠;将Sftpc-Cre+/+小鼠与野生型小鼠交配获得更多的Sftpc-Cre+/-小鼠.将Sftpc-Cre+/+或子代Sftpc-Cre+/-小鼠与SENP1flox/-或子代SENP1flox/flox小鼠进行杂交,获得SENP1flox/-Sftpc-Cre+/-双杂合小鼠.将SENP1flox/-Sftpc-Cre+/-小鼠与SENP1flox/flox小鼠杂交,获得SENP1flox/floxSftpc-Cre+/-小鼠.剪鼠尾提取基因组DNA,行PCR扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳确定小鼠基因型.取SENP1flox/flox和SENP1flox/floxSftpc-Cre+/-小鼠肺组织行免疫荧光双标实验及Western blot以验证SENP1敲除效果;取SENP1flox/flox和SENP1flox/floxSftpc-Cre+/-小鼠心、肝、肺、肾组织行苏木精-伊红染色以观察两组小鼠各脏器的组织形态.
结果与结论:琼脂糖凝胶电泳正确筛选出SENP1flox/floxSftpc-Cre+/-小鼠.免疫荧光双标实验显示,与SENP1flox/flox小鼠相比,SENP1flox/floxSftpc-Cre+/-小鼠肺组织中SENP1的平均荧光强度降低(P<0.01),且SENP1和Sftpc未见明显共定位(P<0.01).Western blot结果显示,与SENP1flox/flox小鼠相比,SENP1flox/floxSftpc-Cre+/-小鼠肺组织中SENP1蛋白表达降低(P<0.001).苏木精-伊红染色结果显示SENP1flox/flox和SENP1flox/floxSftpc-Cre+/-小鼠的心、肝、肺和肾脏组织形态无明显改变.该研究利用Cre-loxP重组酶系统成功构建了肺泡Ⅱ型上皮细胞特异性敲除SENP1基因小鼠,为后续研究SENP1基因在以肺泡Ⅱ型上皮细胞为主要损伤细胞的肺疾病如支气管肺发育不良、特发性肺纤维化中的作用提供了良好的工具.
关键词：SENP1Cre-loxP重组酶系统肺泡Ⅱ型上皮细胞条件性基因敲除小鼠
分类号：R459.9(治疗学)R329-3(人体形态学)R722.6(新生儿、早产儿疾病)
论文发表日期：2025-05-11
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 2943-2950 )
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