DOI: 10.12307/2025.750
过表达促红细胞生成素人脐带间充质干细胞对缺血缺氧SH-SY5Y细胞凋亡的影响
孔宁1
唐吉祥1
侯豫博1
孟澜2
孙蕾3
马保东3
邵一鸣3
靳冉冉3
岳寒4
张辉5
1.新乡医学院,河南省新乡市 453003;郑州大学附属郑州中心医院,神经外科,河南省郑州市 4500072.郑州大学附属郑州中心医院,神经外科,河南省郑州市 450007;郑州大学,河南省郑州市 4500013.郑州大学附属郑州中心医院,干细胞再生医学转化中心,河南省郑州市 4500074.河南省人民医院干细胞再生医学中心,河南省郑州市 4500045.郑州大学附属郑州中心医院,神经外科,河南省郑州市 450007
摘要：背景:长链非编码RNA(LncRNA)在神经系统发育及神经性疾病中扮演着重要角色,课题组前期研究证明了缺血缺氧环境下过表达促红细胞生成素的人脐带间充质干细胞(EPO-MSCs)具有更好的神经保护功能,且显著激活了LncRNA XIST的表达.研究表明XIST与缺血缺氧脑病的发病机制有关,但其受EPO-MSCs调控进而保护缺血缺氧神经元的作用和机制尚不清楚.
目的:探讨LncRNA XIST响应EPO-MSCs信号对缺血缺氧SH-SY5Y细胞凋亡影响的新机制.
方法:①通过慢病毒转染构建敲低LncRNA XIST(sh-XIST)和阴性对照(NC-XIST)SH-SY5Y细胞株,采用氧-葡萄糖剥夺诱导细胞缺氧缺血损伤,使用Transwell小室构建EPO-MSCs和sh-XIST、NC-XIST缺血缺氧SH-SY5Y细胞非接触共培养体系,使用CCK-8方法检测SH-SY5Y细胞的增殖能力,使用细胞划痕实验检测SH-SY5Y细胞的迁移能力,使用流式细胞仪检测SH-SY5Y细胞凋亡情况.②RNA-seq生信分析筛选sh-XIST与NC-XIST细胞株差异表达基因和通路,利用双荧光素酶实验验证miR-124-3p与靶基因XIST和GRIN1之间的关系,通过qRT-PCR验证下游miR-124-3p、GRIN1基因的表达水平.③加入miR-124-3p抑制剂和模拟物验证缺血缺氧并与EPO-MSCs共培养后SH-SY5Y的表型变化.
结果与结论:①与NC-XIST组相比,sh-XIST组SH-SY5Y细胞缺血缺氧损伤并与EPO-MSCs共培养后的增殖和迁移能力下降,细胞凋亡增加.②双荧光素酶实验结果显示,miR-124-3p与其靶基因XIST之间存在相互作用.在缺血缺氧条件下,转染miR-124-3p mimics的SH-SY5Y细胞在与EPO-MSCs共培养后表现出细胞凋亡减少的情况;相反,当SH-SY5Y细胞转染miR-124-3p inhibitor时,在相同的缺血缺氧条件及与EPO-MSCs共培养的情况下,细胞凋亡则显著增加.③通过对sh-XIST进行转录组测序和生物信息学分析筛选得到显著下调的神经活性配体-受体通路及中枢神经系统发育关键受体基因GRIN1.④双荧光素酶实验结果显示,miR-124-3p与GRIN1相互作用,与NC-XIST组相比,缺血缺氧后sh-XIST组SH-SY5Y细胞GRIN1表达显著下调.结果表明,LncRNA XIST通过上调miR-124-3p从而促进GRIN1表达,进而减少缺血缺氧并与EPO-MSCs共培养SH-SY5Y细胞凋亡,增强其增殖、迁移能力;sh-XIST可以阻断这一保护功能.
关键词：缺血缺氧脑病促红细胞生成素脐带间充质干细胞长链非编码RNA基因修饰XISTmiR-124-3pGRIN1工程化干细胞
分类号：R459.9(治疗学)R318(医用一般科学)Q421(神经生理学)
论文发表日期：2025-12-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：10( 7752-7761 )
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