谷氨酰胺对激素诱导骨微血管内皮细胞凋亡的影响

昝永锋; 宋科官; 刘玉达

doi:10.12307/2026.660

摘要：背景:糖皮质激素能够显著抑制人股骨头骨微血管内皮细胞中磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphatidylinositol 3 kinase/protein kinase B/mammalian target of rapamycin,PI3K/Akt/mTOR)信号通路相关蛋白的表达,从而触发细胞的程序性死亡和坏死过程.已有证据表明谷氨酰胺能够激活PI3K/Akt/mTOR信号通路. 目的:探究谷氨酰胺对糖皮质激素诱导骨微血管内皮细胞凋亡的影响. 方法:从SD大鼠双侧股骨头中分离提取骨微血管内皮细胞,取传代第3代骨微血管内皮细胞,培养12 h后分4组处理:对照组常规培养24 h,糖皮质激素组加入甲基泼尼松龙琥珀酸钠处理24 h,糖皮质激素+谷氨酰胺组加入甲基泼尼松龙琥珀酸钠处理12 h后添加谷氨酰胺处理12 h,糖皮质激素+谷氨酰胺+LY294002组加入甲基泼尼松龙琥珀酸钠处理12 h后添加谷氨酰胺处理6 h,再加入PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002处理6 h.培养结束后,AO-PI双重荧光染色及Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,RT-qPCR检测BCL-2、Bax、PI3K、Akt、mTOR mRNA表达,Western Blot检测BCL-2、Bax、PI3K、Akt、mTOR、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达. 结果与结论:①糖皮质激素组细胞凋亡率高于对照组、糖皮质激素+谷氨酰胺组(P<0.05),糖皮质激素+谷氨酰胺+LY294002组细胞凋亡率高于糖皮质激素+谷氨酰胺组(P<0.05);②糖皮质激素组BCL-2、PI3K、Akt、mTOR mRNA表达低于对照组、糖皮质激素+谷氨酰胺组(P<0.05),Bax mRNA表达高于对照组、糖皮质激素+谷氨酰胺组(P<0.05);糖皮质激素+谷氨酰胺+LY294002组BCL-2、PI3K、Akt、mTOR mRNA表达低于糖皮质激素+谷氨酰胺组(P<0.05),Bax mRNA表达高于糖皮质激素+谷氨酰胺组(P<0.05);③糖皮质激素组BCL-2、PI3K、Akt、mTOR、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达低于对照组、糖皮质激素+谷氨酰胺组(P<0.05),Bax蛋白达高于对照组、糖皮质激素+谷氨酰胺组(P<0.05);糖皮质激素+谷氨酰胺+LY294002组BCL-2、PI3K、Akt、mTOR、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达低于糖皮质激素+谷氨酰胺组(P<0.05),Bax蛋白表达高于糖皮质激素+谷氨酰胺组(P<0.05);④结果表明,谷氨酰胺通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路减少糖皮质激素诱导的骨微血管内皮细胞凋亡.